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1、microRNA(miRNA)可以通過和目的基因mRNA的3’UTR端不完全互補(bǔ)結(jié)合而抑制目的基因的表達(dá),miR在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、增殖、分化及粘附性等方面發(fā)揮著重要的作用。已有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-100在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào);我們前期工作亦提示miR-100在乳腺癌患者血清中表達(dá)下降。此外,miR-145可以調(diào)控一系列致癌基因的表達(dá),已有相關(guān)研究報(bào)道恢復(fù)miR-145在乳腺癌細(xì)胞系的表達(dá)可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡壞死、抑制腫瘤細(xì)胞的增殖及浸潤(rùn)能力。m
2、iR在腫瘤的治療方面有良好的應(yīng)用前景,但目前尚缺乏安全、高效、緩釋、特異性強(qiáng)的體內(nèi)轉(zhuǎn)染miR的方法。基于此問題,本項(xiàng)目旨在通過化學(xué)合成研制一種新型的脂質(zhì)體納米顆粒(lipo-NPs)轉(zhuǎn)染系統(tǒng),可以在體外、體內(nèi)高效轉(zhuǎn)運(yùn)有抑癌作用的miR,最終達(dá)到治療腫瘤的目的。本論文則重點(diǎn)討論、驗(yàn)證lipo-NPs在體外的轉(zhuǎn)染效果,miR選取有潛在抑制乳腺癌生長(zhǎng)作用的miR-100和有明確抑癌作用的miR-145。本實(shí)驗(yàn)對(duì)制備的lipo-NPs的理化性質(zhì)
3、、轉(zhuǎn)染miRs的效率及其生物學(xué)功能進(jìn)行了探索。
結(jié)果提示,lipo-NPs粒徑均一,形態(tài)穩(wěn)定,可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,并將Cy3-siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞胞漿中。DOTAP和核酸的最佳摩爾比為40:1,此時(shí)lipo-NPs的轉(zhuǎn)染效率高于陽(yáng)性對(duì)照組lipofectamine-2000。隨后,我們證實(shí)經(jīng)lipo-NPs轉(zhuǎn)染miR-100-mimics及miR-145-mimics后miR-100/miR-145在細(xì)胞中的表達(dá)顯著上
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