縫隙連接蛋白43磷酸化在腦血管痙攣中作用的研究.pdf

1、目的:
　　 血管系統(tǒng)縫隙連接(GJ)主要是由縫隙連接蛋白(Cx)37、40、43、45組成,通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞間縫隙連接通訊(GJIC)在蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后腦血管痙攣(CVS)的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用；同時(shí),磷酸化是影響GJ功能的主要方式之一,Cx磷酸化表達(dá)的變化通過(guò)調(diào)節(jié)GJIC參與了心臟、神經(jīng)系統(tǒng)等疾病的病理過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上,探討Cx43磷酸化在兔SAH后CVS中的表達(dá)變化及其與CVS的關(guān)系。為更進(jìn)一步研究腦

2、血管GJ通道在SAH后CVS的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ),為更有效防治CVS尋找一個(gè)嶄新的途徑。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組:采用新西蘭純種大白兔102只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=12,A組)、單純腦池注血組(n=30,B組)、甘珀酸(CBX)腦池處理組(n=30,C組)、溶媒腦池處理組(n=30,D組)。從A組隨機(jī)選取6只行腦血管造影(DSA)及形態(tài)學(xué)(HE)觀察,6只行western blotting分析；從B、C、D三

3、組各隨機(jī)取6只行DSA及HE觀察,其余24只隨機(jī)分成4小組,每小組6只,分別于SAH后1d、3d、7d、14d行western blotting分析。
　　 2、兔SAH后CVS模型的建立及藥物處理:利用枕大池二次注血法建立體內(nèi)CVS模型。GJ阻斷劑CBX在二次腦池注血后連續(xù)三日用同樣方法緩慢注入枕大池。
　　 3、DSA及HE觀察:用于DSA的實(shí)驗(yàn)兔經(jīng)麻醉后,分別在腦池注血前及二次注血后第7天施行DSA。動(dòng)物二次造影后

4、,經(jīng)心臟行全腦灌注固定作HE染色,光鏡下觀察血管壁組織形態(tài)學(xué)的變化。
　　 4、Western Blotting檢測(cè)Cx43磷酸化與去磷酸化表達(dá)變化:用于westernblotting檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)兔,靜脈過(guò)量麻醉后,快速開(kāi)顱取出基底動(dòng)脈,常規(guī)提取血管總蛋白,用于western blotting分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、成功建立兔SAH后CVS模型:在SAH后第7天,DSA及光鏡觀察證實(shí)基底動(dòng)脈管腔狹窄,形態(tài)學(xué)

5、變化明顯。
　　 2、基底動(dòng)脈Cx43磷酸化與去磷酸化表達(dá)變化:正常組基底動(dòng)脈Cx43磷酸化表達(dá)量較低,而去磷酸化表達(dá)量較高:SAH后1d、3d、7d、14d,Cx43磷酸化表達(dá)顯著增加,而去磷酸化表達(dá)顯著減少,且兩者均呈時(shí)相性變化。
　　 3、腦池內(nèi)注入CBX后,DSA證實(shí)CVS緩解；基底動(dòng)脈Cx43磷酸化表達(dá)顯著減少,Cx43去磷酸化表達(dá)顯著增加,并且兩者表達(dá)均失去時(shí)相性變化。
　　 結(jié)論:
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