縫隙連接在內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)的腦血管痙攣中作用的研究.pdf

1、目的： 內(nèi)皮素-1(ET-1)在蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后腦血管痙攣(CVS)的病理過程中是最主要誘發(fā)因子之一；同樣縫隙連接(gap junction GJ)在許多心腦血管疾病中扮演重要角色。本實驗在前期研究的基礎(chǔ)上，研究Cx43在ET-1誘導(dǎo)的CVS中的表達變化及其受ET-1調(diào)節(jié)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。為更深入研究腦血管GJ通道參與蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后CVS的機制奠定基礎(chǔ)，可能為更有效防治CVS尋找一個嶄新的途徑。 方法

2、： 1.兔體內(nèi)CVS模型的建立及藥物處理：采用同種系兔。靜脈麻醉動物后，行小腦延髓池穿刺，注入ET-1(400pmol/只)以建立體內(nèi)CVS模型。ET受體A(ETRA)拮抗劑、蛋白磷酸激酶C(PKC)抑制劑、GJ阻斷劑均早期通過同樣方法注入小腦延髓池。采用選擇性的腦基底動脈(basilar arteryBA)造影技術(shù)測量血管直徑變化；Western blotting檢測兔基底動脈Cx43蛋白表達的時相性變化。 2.體外游

3、離腦血管環(huán)張力實驗：各實驗組動物處死后斷頭取腦，分離基底動脈，將其剪成3-4mm的動脈環(huán)；ET-1、ETRA拮抗劑、PKC抑制劑、GJ阻斷劑等各種藥物孵育，應(yīng)用生物信息轉(zhuǎn)換記錄儀記錄血管張力的變化。 3.體外腦血管條孵育：各實驗組動物被處死后斷頭取腦，顯微鏡下分離基底動脈，將其剪成完整的動脈條；ET-1、ETRA拮抗劑、PKC抑制劑、GJ阻斷劑等各種藥物孵育動脈條；Western Blotting檢測兔基底動脈條Cx43蛋白表達

4、的時相性變化。 結(jié)果： 1.成功建立ET-1誘導(dǎo)的CVS模型，正常組腦血管平滑肌層Cx43蛋白表達量較低；注入ET-1后24h、48h、72h、96h，血管平滑肌層Cx43蛋白表達顯著增加，并呈時相性變化；分別應(yīng)用ETRA拮抗劑、PKC抑制劑、GJ阻斷劑均可減弱ET-1引起的Cx43蛋白表達增加并顯著緩解了ET-1誘導(dǎo)的CVS。 2.ET-1引起游離腦血管環(huán)濃度依賴性的收縮；分別應(yīng)用ETRA拮抗劑、PKC抑制劑、

5、GJ阻斷劑均可顯著緩解ET-1誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮。 3.ET-1孵育體外腦血管條后10min、30min、60min、120min，血管條平滑肌層Cx43蛋白表達顯著增加，并呈時相性變化；分別應(yīng)用ETRA拮抗劑、PKC抑制劑、GJ阻斷劑均可顯著減弱ET-1引起的Cx43蛋白表達增加。 結(jié)論： 1.CVS中，ET-1通過PKC等途徑誘導(dǎo)局部血管平滑肌收縮，并通過此途徑上調(diào)平滑肌Cx43蛋白的表達及GJ功能。