LDR、IM7誘導CML白血病干-祖細胞凋亡及其作用機制的實驗研究.pdf

1、目的:體外檢測LDR、IM7對CML白血病干/祖細胞凋亡的影響,并探討其相關作用機制。
　　 方法:取20例健康產(chǎn)婦臍血100ml,免疫磁株法分離純化CD34+、CD38-的正常造血干細胞(HSCs);取20例初診慢性髓細胞白血病(CML)慢性期患者骨髓液5～10ml,免疫磁株法分離純化富集CD34+、CD38-、CD123+的自血病干/祖細胞。處理一:將上述分離出的兩組細胞給予不同的劑量(0、12.5和50cGy)照射,輻照后

2、于24、48和72h收集細胞,流式細胞儀檢測不同劑量對兩種干/祖細胞的細胞周期分椎及凋亡率的影響;RT-PCR和熒光實時定量PCR檢測兩種干/祖細胞中P16基因的變化。處理二:將分離出的白血病干/祖細胞與IM7(20μg/ml)孵育后,應用Annexin-V試劑盒檢測IM7誘導LSCs凋亡狀況;熒光實時定量PCR及RT-PCR檢測LSCs中原癌基因C-myc、NF-kB表達狀況;Western-blot檢測LSC中Bcl-2蛋白表達變化

3、。
　　 結果:
　　 (1)CML-LSCs經(jīng)12.5cGy劑量照射后P16 mRNA表達略上調,50cGy劑量照射后P16 mRNA水平明顯增高(P=0.002),而HSCs經(jīng)各劑量點LDR處理后P16基因轉錄水平無明顯的變化。
　　 (2)LSCs經(jīng)12.5cGy劑量處理后48h及50cGy劑量點照射后72h均出現(xiàn)了G0/G1期阻滯現(xiàn)象。
　　 (3)LSCs經(jīng)LDR處理后,細胞的早期凋亡率隨時間推

4、移逐漸增加,50cGy照射后72h處凋亡率(％)為17.75±11.76,與未照射組(8.13±4.71)相比,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 (4)經(jīng)IM7孵育后LSCs的早期凋亡率(％)由對照組5.42±1.84升高至12.58±2.84。
　　 (5)熒光實時定量PCR及RT-PCR檢測結果均提示IM7孵育后LSCs中原癌基因C-myc、NF-kB mRNA水平表達明顯降低,同時NF-KB激活-核轉運檢測結果表明IM7孵

5、育后LSCs中NF-kB的活性受到抑制。
　　 (6)IM7(20μg/ml)能顯著抑制CML-LSCs中Bcl-2蛋白表達。
　　 結論:
　　 1.LDR及IM7在體外均能誘導CML白血病干/祖細胞的凋亡。
　　 2.LDR可能通過P16基因轉錄水平的表達上調,使得CML-LSCs阻滯在G0/G1期,促進LSCs的凋亡。
　　 3.抗CD44單克隆抗體IM7與白血病干/祖細胞上的受體CD44分