K562-BALB-c裸鼠白血病模型的建立及LDR、IM7對CML患者骨髓干-祖細胞集落形成能力影響的研究.pdf

1、目的：探討人慢性粒細胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)急變細胞系K562在BALB/c裸鼠體內(nèi)建立白血病模型的方法以及K562細胞在BALB/c裸鼠體內(nèi)的生物學(xué)行為，為CML各種治療手段的研究提供實驗用動物模型。 方法： 1.4～6周齡的BALB/c裸鼠在無菌條件下行脾切除術(shù)(Splenetomy),環(huán)磷酰胺腹腔注射(Cytoxan introperitoneal injecti

2、on)及全身亞致死輻射(Sublethal irradiation)預(yù)處理(SCI預(yù)處理)，輻射后的BALB/c 裸鼠經(jīng)腹腔(9只)、尾靜脈(3只)接種對數(shù)生長期的K562細胞1×107個/只。 2.體外培養(yǎng)人CML急變細胞系K562，取對數(shù)生長期的細胞接種BALB/c裸鼠。 3.BALB/c裸鼠接種K562細胞后，觀察其生存狀態(tài)，每隔10～14天尾靜脈取血，血涂片觀察白血病細胞，流式細胞儀檢測CD13、CD45抗原，至

3、BALB/c裸鼠將死亡時，取裸鼠骨髓，檢測骨髓中CD13、CD45抗原表達情況，并取BALB/c裸鼠重要臟器肝、腎、肺及局部瘤塊做病理切片，觀察白血病細胞浸潤臟器情況。 結(jié)果： 1.SCI預(yù)處理的BALB/c裸鼠經(jīng)接種K562細胞后，隨著時間的延長，裸鼠不同程度地出現(xiàn)萎靡少動、步態(tài)不穩(wěn)、進食減少、消瘦、脊背拱起，逐漸衰竭死亡。生存時間為45.5±6.1天(34～55天)。經(jīng)腹腔接種者，于3周后腹腔開始出現(xiàn)腫塊，并逐漸增大

4、，腫塊質(zhì)韌。 2.外周血涂片：早期未發(fā)現(xiàn)白血病細胞，第3周開始觀察到K562白血病細胞，比例為2.3±0.9％(1％～4％)，病程后期，白血病細胞比例增加，占7.8±2.4％(4％～11％)。 3.CD13、CD45抗原表達：第2周檢測到外周血CD13表達率為6.13±1.65％，CD45表達率為2.84±0.26％；第4周CD13表達升高為22.55±5.24％，CD45表達為2.93±0.31％。裸鼠處死時，骨髓中C

5、D13表達比例為6.19±0.82％，CD45表達比例為4.86±1.66％。 4.病理檢查：裸鼠肝臟腫大，肝、肺、腎可見白血病細胞浸潤，腹腔注射部位形成瘤塊，未侵及其它器官，取瘤塊做病理，可見大量白血病細胞。 結(jié)論：BALB/c裸鼠經(jīng)SCI預(yù)處理后，經(jīng)腹腔注射、靜脈注射途徑移植可成功建立起K562/BALB/c裸鼠白血病模型，模型發(fā)病時間長，而且局部形成的瘤塊質(zhì)韌成型，有效解決了K562細胞在裸小鼠局部形成的瘤塊松軟不