NF-κB特異性抑制劑PDTC對人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549增殖及AEG-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的
　　研究NF-κB特異性抑制劑PDTC(pyrrolidinedithiocarbamate)對人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及星形細(xì)胞上調(diào)基因AEG-1表達(dá)的影響，為進(jìn)一步了解PDTC體外抗肺癌作用的價(jià)值及機(jī)制，為肺癌預(yù)防和治療提供重要的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　方法
　　1.體外培養(yǎng)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞株，用不同濃度(25、50、100、200μmol/L)的PDTC處理A549細(xì)胞，分別于24、4

2、8和72h后，噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測細(xì)胞光密度值，分析PDTC對細(xì)胞增殖的抑制作用;
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物處理后細(xì)胞的周期變化情況;
　　3.Hoechst33342熒光染色觀察藥物處理后細(xì)胞形態(tài)變化情況;
　　4.RT-PCR檢測AEG-1的mRNA表達(dá)情況;
　　5.采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析所有檢測數(shù)據(jù)，進(jìn)行均值、標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算，并做相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多樣本均數(shù)比較時，經(jīng)方

3、差齊性檢驗(yàn)后，若方差齊性則采用單因素方差分析（F檢驗(yàn)），若不符合方差齊性則采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　1.MTT結(jié)果顯示:PDTC能有效抑制A549細(xì)胞的生長，各濃度處理組的細(xì)胞經(jīng)不同時間處理后，其增殖抑制率與同一組同一時間點(diǎn)的對照組相比，腫瘤細(xì)胞增殖活性明顯受到抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并且具有時間和劑量依賴性;
　　2.PDTC能改變A549細(xì)胞

4、的周期分布，作用后細(xì)胞的G0/G1期細(xì)胞比例上升。各濃度組的細(xì)胞周期分布與同一時間點(diǎn)對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，呈時間和劑量依賴性。
　　3.Hoechst33342熒光染色后顯微鏡下觀察顯示:藥物作用組細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，有典型的細(xì)胞核凝聚特征并出現(xiàn)凋亡小體等明顯凋亡改變;
　　4.RT-PCR和Westernblot結(jié)果顯示:隨著PDTC濃度的增加及作用時間的延長，癌細(xì)胞內(nèi)AEG-1mRNA和蛋白表達(dá)水平顯