三羥異黃酮對HER-2-neu高表達(dá)人乳腺癌細(xì)胞輻射敏感性的影響及其機(jī)理研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文三羥異黃酮對HER-2/neu高表達(dá)人乳腺癌細(xì)胞輻射敏感性的影響及其機(jī)理研究姓名：李明申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師：糜漫天20090501第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞輻射敏感性的作用；其次通過蛋白印跡分析、R T ．P C R 等方法，研究三羥異黃酮對乳腺癌細(xì)胞A k t 、P ．A k t 、p 5 3 、E R K 2 、H E R ．2 、p 2 1 m R N A 及蛋白表達(dá)的影響，從

2、而闡明三羥異黃酮增強(qiáng)H E R ．2 ／n e u 高表達(dá)乳腺癌細(xì)胞輻射敏感性的分子機(jī)制主要研究結(jié)果和結(jié)論如下：1 ．通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)將p C M V ／E R B B 2 質(zhì)粒和p C I n e o 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入M C F ．7 乳腺癌細(xì)胞，成功建立H E R ．2 ／n e u 穩(wěn)定高表達(dá)的M C F ．7 細(xì)胞( 命名為M C F ．7 ／H E R ．2 ) 。2 ．分別以( 5 ，1 0 ，2 0 ，4 0 ，7 0 ，1

3、0 0 ，1 3 0 ，1 6 0 ，1 9 0 ，2 2 0 ，2 5 0 ，2 8 0 ，3 1 0 ，3 4 0p m o l ／L ) 三羥異黃酮處理M D A ．M B ．4 5 3 、M C F ．7 ／H E R ．2 、M C F ．7 三種乳腺癌細(xì)胞2 4 h ，M T T 檢測發(fā)現(xiàn)三羥異黃酮對三種乳腺癌細(xì)胞的增殖能力均有影響，對M D A ．M B 一4 5 3細(xì)胞的增殖抑制作用隨處理濃度增加而增大，呈劑量依賴關(guān)系，

4、I C 5 0 約為1 0 0 m n o l ／L ；對M C F ．7 ／H E R ．2 和M C F ．7 細(xì)胞在低濃度表現(xiàn)為增殖促進(jìn)作用，但在分別大于4 0l x m o l ／L 和1 0 9 m o l ／L 時(shí)表現(xiàn)為增殖抑制作用。3 ．1 0 0 1 a m o l ／L 三羥異黃酮聯(lián)合或單獨(dú)1 0 G y Y 射線處理M D A ．M B 一4 5 3 、M C F ．7 ／H E R ．2 、M C F ．7 三種乳

5、腺癌細(xì)胞2 4 h 后，流式細(xì)胞儀分析，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，M D A ．M B ．4 5 3 、M C F ．7 ／H E R ．2 細(xì)胞的射線組凋亡率，無顯著差異( p > O ．0 5 ) ，而三羥異黃酮聯(lián)合射線組的凋亡率分別增加3 2 ．6 3 ％％( pO ．0 5 ) 。提示H E R ．2 ／n e u 高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞對射線誘導(dǎo)的凋亡有抵抗作用，但三羥異黃酮可增強(qiáng)Y 射線誘導(dǎo)H E R - 2 ／n e u 高表達(dá)

6、乳腺癌細(xì)胞M D A ．M B ．4 5 3細(xì)胞、M C F 一7 ／H E R ．2 細(xì)胞的凋亡作用。4 ．1 0 0 l x m o l ／L 三羥異黃酮聯(lián)合或單獨(dú)1 0 G yY 射線處理M D A ．M B ．4 5 3 、M C F ．7 ／H E R ．2 、M C F ．7 三種乳腺癌細(xì)胞2 4 h ，免疫印跡和P C R 分析，發(fā)現(xiàn)P ．A k t 蛋白和m R N A 表達(dá)減弱，而H E R 一2 和A k t 均沒有

7、變化在三種細(xì)胞中；在M C F ．7 ／H E R - 2 細(xì)胞中，p 5 3 蛋白和m R N A 表達(dá)量增強(qiáng)；在M D A ．M B ．4 5 3 細(xì)胞中p 2 1 蛋白和m R N A 表達(dá)增強(qiáng)，而E R K 2 則表達(dá)減弱；提示：三羥異黃酮可能是通過抑制H E R ．2 ／n e u 的T P K活性，阻斷其介導(dǎo)的P 1 3 K ／A K T 和M A P K 的激活，增強(qiáng)H E R ．2 ／n e u 高表達(dá)乳腺癌細(xì)胞的輻射敏