HBx下調(diào)線粒體抗病毒信號蛋白(MAVS)來影響機(jī)體的先天性免疫.pdf

1、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)持續(xù)感染是誘發(fā)原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)產(chǎn)生的主要原因,X蛋白(HBx)在其中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。HBx基因是由乙型肝炎病毒基因組最小的開放讀碼框架(open reading fragment,ORF)編碼的,全長465bp,編碼154個(gè)氨基酸。線粒體抗病毒信號蛋白(mitochondria antiviral signaling p

2、rotein,MAVS)是2005年由四個(gè)不同的科研小組同時(shí)報(bào)道的一個(gè)在先天性免疫反應(yīng)中起接頭作用的蛋白,其通過自身的疏水跨膜結(jié)構(gòu)域(transmembrane domain,TM)定位在線粒體外膜上,是線粒體中發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)與先天性免疫相關(guān)的蛋白質(zhì)。人類的MAVS基因位于20號染色體的短臂20P13,其cDNA全長為1620bp,編碼一個(gè)具有540個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。MAVS在調(diào)節(jié)機(jī)體的先天性免疫反應(yīng)中具有多種功能,它可以激活轉(zhuǎn)錄因子NF

3、-κB和IRF-3,這些有活性的轉(zhuǎn)錄因子協(xié)同調(diào)控β干擾素基因的表達(dá)。
　　本課題通過免疫沉淀、免疫印記以及GST-Pull Down等方法發(fā)現(xiàn)了HBx和MAVS在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外都存在相互作用,并且證明了MAVS是通過TM結(jié)構(gòu)域和HBx73-154位氨基酸相互作用的,缺失TM結(jié)構(gòu)域的MAVS或73-154位氨基酸的HBx彼此之間就不能再相互作用。利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測HBV-DNA和HBx對N-RIG-I、PolydAT以及M

4、AVS誘導(dǎo)的IFN-β-luc、NF-κB-luc和IRF-3-luc報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄水平的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HBV-DNA和HBx可以抑制由N-RIG-I、PolydAT以及MAVS誘導(dǎo)引起的IFN-β-luc、NF-κB-luc和IRF3-luc報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄水平的激活,并呈現(xiàn)劑量依賴性。通過對整個(gè)β干擾素信號通路的研究,我們發(fā)現(xiàn)HBx是以MAVS為作用靶點(diǎn)來影響β干擾素的產(chǎn)生;通過熒光定量PCR方法檢測β干擾素的mRNA水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HBx

5、是在轉(zhuǎn)錄水平上影響β干擾素基因的表達(dá)。進(jìn)一步研究證明,HBx可以影響內(nèi)源MAVS蛋白的表達(dá)水平,并呈現(xiàn)劑量依賴性;HBx,一方面可以介導(dǎo)MAVS泛素化通過蛋白酶體途徑降解;另一方面通過縮短MAVS在細(xì)胞內(nèi)的半衰期來影響MAVS的穩(wěn)定性。另外,在病毒感染的情況下,MAVS與其上游信號分子RIG-1的相互作用隨著感染時(shí)間的增長逐漸增強(qiáng),而當(dāng)細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染有HBX時(shí),RIG-1和MAVS的相互結(jié)合隨著感染時(shí)間的增長逐漸減弱。
　　本研究首次