中國(guó)東南部人群脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)各基因亞型的頻率與臨床分析及利用自制CAG重復(fù)梯度分子量標(biāo)記物檢測(cè)千余中國(guó)人ATXN3的野生型CAG重復(fù)分布特征.pdf

1、本文對(duì)中國(guó)東南部人群脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)各基因亞型的頻率與臨床分析及利用自制CAG重復(fù)梯度分子量標(biāo)記物檢測(cè)千余中國(guó)人ATXN3的野生型CAG重復(fù)分布特征進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：中國(guó)東南部人群脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)基因亞型的頻率與臨床分析。
　　 目的：⑴分析中國(guó)東南部人群脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)各基因亞型的頻率分布。⑵分析中國(guó)東南部人群脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)各基因亞型的臨床資料。
　　 方法：①利用聚合

2、酶連反應(yīng)結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳或變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法對(duì)SCA1、2、3、6、7、12、17及DRPLA進(jìn)行基因分析。②利用DNA測(cè)序檢測(cè)CAG重復(fù)數(shù)。
　　 結(jié)果：⑴SCA3的頻率為72.5％(100/138)，SCA1、6、7及DRPLA的頻率分別均為為0.7％(1/138)，沒(méi)有檢測(cè)到SCA2、12及17的異常擴(kuò)增。⑵三個(gè)臨床診斷為復(fù)雜型常染色體顯性遺傳性痙攣性截癱的家系經(jīng)基因分析證實(shí)為SCA3家系。⑶檢測(cè)到一個(gè)攜帶18

3、9個(gè)CAG重復(fù)的嬰兒期發(fā)病的SCA7病例。⑷檢測(cè)到一個(gè)攜帶63個(gè)CAG重復(fù)的DRPLA病例。
　　 結(jié)論：①SCA各亞型的頻率分布的差異與種群及同地域相關(guān)。②對(duì)AD-HSP患者需進(jìn)行SCA3基因篩查。③首次報(bào)道經(jīng)基因分析證實(shí)的嬰兒期發(fā)病的中國(guó)SCA7病例且數(shù)據(jù)提示未合并多器官損害的病例的生存期高于合并多器官損害的病例。④首次報(bào)道經(jīng)基因分析證實(shí)的中國(guó)大陸DRPLA家系。
　　 第二部分：利用自制CAG重復(fù)梯度分子量標(biāo)記物檢

4、測(cè)千余中國(guó)人ATXN3的野生型CAG重復(fù)分布特征。
　　 目的：⑴探討在PCR擴(kuò)增Machado-Joseph病的異常片段時(shí)，LA Taq DNA聚合酶及Taq DNA聚合酶之間的反應(yīng)效率的差異。⑵制備一種全新的CAG重復(fù)梯度作為DNA size marker并檢測(cè)該重復(fù)梯度在變性聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí)的分辨率。⑶檢測(cè)中國(guó)Machado-Joseph病患者在脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)患者中的相對(duì)發(fā)病率。⑷檢測(cè)中國(guó)漢族人群野生型染色體ATX

5、N3的CAG重復(fù)分布特征。⑸研究同ATXN3的CAG重復(fù)序列緊密連鎖的三個(gè)單核苷酸多態(tài)——A669TG/G669TG、C987GG/G987GG及TAAT1118/TAC1118的基因型及單倍體型。⑹重新界定ATXN3的CAG重復(fù)范圍。
　　 方法：①在相同的反應(yīng)條件及反應(yīng)體系下，分別使用LA Taq DNA聚合酶及Taq DNA聚合酶擴(kuò)增12名MJD患者的異常片段以比較二者的擴(kuò)增效率。②采用基因重組結(jié)合PCR的方法進(jìn)行CAG重

6、復(fù)梯度的制備并檢測(cè)其在PAGE中的分辨率。③利用PCR結(jié)合PAGE的方法對(duì)138名無(wú)親緣關(guān)系的SCA家系的先證者及1003名無(wú)親緣關(guān)系的中國(guó)漢族正常個(gè)體的正常及異常的片段進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，PCR使用的是對(duì)高GC含量的序列更加敏感的LA Taq DNA聚合酶。④利用位點(diǎn)特異性PCR結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳或PACE及PCR結(jié)合單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析的方法對(duì)94名正常個(gè)體和30例MJD患者的SNP基因型及單倍體型進(jìn)行檢測(cè)。
　　 結(jié)果：⑴在使用L

7、ATaq DNA聚合酶進(jìn)行PCR時(shí)，所有12名MJD患者的異常片段都被擴(kuò)增出，而使用Taq DNA聚合酶進(jìn)行PCR時(shí)卻只有2名MJD患者的異常片段被擴(kuò)增出。⑵CAG重復(fù)梯度含有有32種不同CAG重復(fù)數(shù)的片段，重復(fù)數(shù)分別為13、14、18-43、45、46、48及49，這些片段在8％變性聚丙烯酰胺凝膠上可以清晰分辨。⑶MJD在SCA中的發(fā)病率為72.5％，顯著高于之前報(bào)道的有關(guān)中國(guó)人及其他亞洲人群的相關(guān)數(shù)據(jù)，在世界范圍內(nèi)也僅次于葡萄牙及巴

8、西人群。⑷在1003名個(gè)體的2006條野生型染色體中，CAG的重復(fù)范圍為13-49，其中有4條染色體的CAG重復(fù)數(shù)分別為46、48、48及49，這是首次在野生型染色體中發(fā)現(xiàn)攜帶中間片段的染色體，大的正常片段的比率為0.28，其為迄今報(bào)道的最高的比率。⑸所有擴(kuò)增片段都具有相同的單倍體型ACA且此單倍體型在大的正常片段組的比率顯著高于非大的正常片段組。
　　 結(jié)論：①在中國(guó)東南部人群中，MJD的相對(duì)發(fā)病率非常高，可能的原因?yàn)樵赑CR