SMS1在B細(xì)胞活化中的作用的初步探討和血清IgG4水平在不同疾病中的檢測.pdf

1、第一部分 SMS1在B細(xì)胞活化中的作用的初步探討
　　【目的】：通過檢測和比較鞘磷脂合成酶1（sphingomyelin synase1,SMS1）敲除小鼠（Knock out,KO）即SMS1-/-小鼠和野生型Wild小鼠（wild type,WT）即SMS1+/+小鼠B細(xì)胞的活化功能。
　　【方法】：斷頸處死SMS1-/-或SMS1+/+小鼠，超凈臺解剖取小鼠脾臟，研磨脾臟，離心，獲得外周血單個核細(xì)胞（periphera

2、l blood mononuclear cells,PBMC)，細(xì)胞計數(shù)；磁珠分選獲得B細(xì)胞；分選后的B細(xì)胞給予不同濃度抗體刺激，濃度設(shè)為F(ab’)2抗IgM抗體：0，1，5，10，20μg/ml，細(xì)胞培養(yǎng)72h，流式檢測B細(xì)胞表面CD69，IgM，CD40，CD80，CD86，霍亂毒素B(cholera toxin B,CTB)的表達(dá)。
　　【結(jié)果】：B細(xì)胞表面 CD69表達(dá)的百分比和平均熒光強(qiáng)度（mean fluoresce

3、nce intensity,MFI）均出現(xiàn)明顯的濃度依賴性，即隨著刺激抗體濃度的增加，CD69的表達(dá)也增加；且KO小鼠的表達(dá)明顯弱于WT小鼠。IgM的檢測結(jié)果提示：抗體刺激B細(xì)胞活化后，B細(xì)胞表面IgM表達(dá)的百分比明顯減少，且SMS1-/-小鼠的表達(dá)略低于SMS1+/+小鼠；IgM表達(dá)的MFI兩者相比未見明顯差異。CD40檢測結(jié)果提示：抗體刺激前后B細(xì)胞表面的CD40表達(dá)百分比和MFI均無明顯差異。CD80的表達(dá)：KO小鼠B細(xì)胞CD80

4、表達(dá)的MFI弱于WT小鼠，且兩者均在刺激抗體濃度為5μg/ml時表達(dá)的MFI出現(xiàn)峰值。CD86和CTB的表達(dá):KO和WT小鼠相比結(jié)果未見明顯差異性。
　　【結(jié)論】：SMS1-/-小鼠B細(xì)胞的活化功能存在異常，其活化功能較SMS1+/+小鼠弱。據(jù)此可推測SMS1的缺失可能導(dǎo)致B細(xì)胞活化功能的異常。
　　第二部分血清IgG4水平在不同疾病中的檢測
　　【目的】：應(yīng)用我們實驗室建立的穩(wěn)定的酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-li

5、nked immunosorbent assay,ELISA)方法檢測IgG4相關(guān)性疾?。↖gG4-related disease，IgG4-RD）及其他疾病中血清IgG4水平，并比較免疫比濁法和ELISA方法兩種不同的方法檢測血清IgG4水平。
　　【方法】：收集2013年3月12日至2014年7月1日共957例患者血清標(biāo)本（包括12例IgG4-RD和945例非IgG4-RD標(biāo)本），采用ELISA方法檢測957例患者血清IgG4

6、水平。同時，送檢其中80例血清標(biāo)本至我院檢驗科應(yīng)用免疫比濁法檢測IgG4水平。
　　【結(jié)果】：12例IgG4-RD患者血清IgG4水平均升高(>1.35g/L)，非IgG4相關(guān)性疾病中血清IgG4陽性的比例為3.39％，在腫瘤疾病中IgG4的陽性率為2.05%，自身免疫性疾病中的陽性率為6.3%。且免疫比濁法和ELISA方法檢測血清IgG4水平的結(jié)果具有一致性。
　　【結(jié)論】：我們實驗室建立的ELISA體系方便可行，具有穩(wěn)定