PsD007-PDT對人喉部細胞的殺傷作用.pdf

1、目的:
　　 喉癌(LaryngealCarcinoma)是來源于喉粘膜上皮組織的惡性腫瘤，雖然近幾十年來傳統(tǒng)的治療方式如手術(shù)、放療和化療等有了很大的改進，但手術(shù)對喉功能的破壞以及放、化療的嚴重副作用使以上治療方式受到極大限制。對于晚期和復(fù)發(fā)喉癌，國內(nèi)外都相繼開展了多種多樣的生物治療，希望能夠減輕患者痛苦。
　　 光動力療法(PhotodynamicTherapy,PDT)是一種激光醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新方法，已被多個國家批準可用

2、于某些腫瘤的治療。影響PDT效果的關(guān)鍵因素不僅體現(xiàn)在光敏劑在腫瘤組織或細胞的選擇性積聚和特定光照波長及強度的選擇上，而且還與光敏劑進入的亞細胞結(jié)構(gòu)和積聚程度有關(guān)。因此探索PDT治療的合適條件，能相對特異性地殺傷腫瘤細胞、減少對健康組織的損害、降低并發(fā)癥以及毒副反應(yīng)等，使其成為一項非常有前途的腫瘤治療方法。本文將通過研究癌光啉(PsD007)誘導(dǎo)的光動力療法在體內(nèi)外對人喉癌細胞Hep2的殺傷作用，初步探索其殺傷機制。
　　 方法:

3、
　　 1、體外實驗
　　 體外培養(yǎng)Hep2細胞，觀察不同時間光敏劑在腫瘤細胞中的孵育特性;MTT法測定在不同光敏劑濃度(3.125-100μg/mL)、光照劑量(1.2-4.8J/cm2)以及三種抗氧化劑的作用下PDT殺傷效果;共聚焦顯微鏡觀察光敏劑的亞細胞定位;AnnexinV/PI雙染法檢測不同劑量PDT處理后細胞凋亡率;DCFH-DA探針檢測PDT處理后2H內(nèi)細胞的活性氧(ROS)產(chǎn)量。
　　 2、在體實

4、驗
　　 建立Balb/c裸鼠喉癌模型，腫瘤組織長至0.5-1cm3時進行PDT處理。其中PsD007的濃度為10mg/kg，光源為635nm的半導(dǎo)體激光器，激光功率密度分別為100、200和400mW/cm2。動物隨機分為對照組（空白對照組、單純光敏劑組、單純照光組）和光動力作用組（30J/cm2組、60J/cm2組、120J/cm2組、240J/cm2組和480J/cm2組）。PDT后觀察并記錄腫瘤生長情況，畫出腫瘤生長曲線

5、和體重變化曲線，第50天處死裸鼠取腫瘤組織，HE切片觀察;取PDT作用后
　　 1、24和48h的腫瘤組織，HE染色觀察其形態(tài)。
　　 結(jié)果:
　　 1、PDT對人喉癌細胞的殺傷作用高于對照組(P＜0.05)，MTT結(jié)果顯示PDT對Hep2的殺傷效果可高達85.4％，光敏劑濃度和光照能量密度都與細胞死亡率呈正相關(guān)，在一定范圍內(nèi)，隨著光敏劑濃度的增加和光照能量的增大，光動力作用對細胞的相對抑制率逐漸增大，調(diào)整光敏劑

6、濃度和光照能量密度，可以優(yōu)化光動力處理效果;PDT4h后凋亡率可達49.5％（能量密度為1.2J/cm2）和70.2％（能量密度為4.8J/cm2）;三種抗氧化劑均能不同程度拮抗PDT對細胞的殺傷效應(yīng)，以疊氮鈉效果最好(P＜0.05);光敏劑在細胞內(nèi)主要定位在線粒體;PDT組細胞內(nèi)ROS含量顯著提高，是單純對照組的2.08倍，PDT后2h更是升至對照組的2.71倍。
　　 2、在體實驗中，PDT組裸鼠的腫瘤生長緩慢，且120J/

7、cm2組和480J/cm2組荷瘤裸鼠在治療16天后全部治愈;PDT組裸鼠的體重明顯比對照組重(P＜0.05)，生存質(zhì)量高。HE切片結(jié)果顯示PDT作用后腫瘤組織發(fā)生明顯的壞死、血管水腫、淋巴細胞浸潤和纖維組織增生等急性損傷的特征。
　　 結(jié)論:
　　 體外和在體實驗均顯示PsD007-PDT對Hep2細胞有明顯的抑制作用。其對細胞的抑制率與光敏劑濃度、激光能量密度、激光功率密度和抗氧化劑有密切關(guān)系。其誘導(dǎo)的凋亡機制以線粒體