百合再生體系的建立及ZM401基因的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、為了獲得無花粉的百合新材料，解決百合花藥污染問題，本研究從新鐵炮百合(Lilium longiflorum×L. formosanum)、亞洲百合(Asiatic hybrid lily)和東方百合(Oriental hybrid lily)中各選一個品種，分別為‘L-1’、‘A-1’和‘O-1’為試材，對百合再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立進(jìn)行了探索。 以小鱗片為外植體，建立了上述三個百合品種的再生體系。新鐵炮百合和亞洲百合在附加

2、1.0mg/L 6-BA和1.0 mg/L NAA的MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，再生率達(dá)100％，每個外植體再生的不定芽數(shù)分別為6.6和4.3；不定芽適宜的生根條件為1/2MS+0.2 mg/L NAA。東方百合小鱗片不定芽分化的最適培養(yǎng)條件為MS+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA，芽誘導(dǎo)率為100％，平均每個外植體再生的不定芽數(shù)為3.5，不定芽在MS+0.1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培養(yǎng)基上生根

3、情況較好。 探討了四種抗生素，即Hyg、G418、Kan和Cef對三個百合品種小鱗片不定芽分化和生長的影響；兩種抑菌抗生素，即Cef和Carb對根癌農(nóng)桿菌的抑制效果；同時還探討了Kan對新鐵炮百合不定芽生根的影響。在此基礎(chǔ)上，確定了各個品種遺傳轉(zhuǎn)化中適宜的抗生素種類和濃度。結(jié)果表明，75 mg/L的Kan對小鱗片不定芽的分化具有很好的篩選效果，抑菌抗生素Cef的適宜濃度為250mg/L，生根篩選時Kan的使用濃度為15 mg/L

4、。 通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)法將ZM401基因?qū)胄妈F炮百合中。遺傳轉(zhuǎn)化中，外植體經(jīng)預(yù)培養(yǎng)3 d，侵染5 min，共培養(yǎng)5 d，獲得了12‰的轉(zhuǎn)化率。以此方法用玉米(Zea Mays L.)花藥發(fā)育相關(guān)基因ZM401轉(zhuǎn)化受體材料，經(jīng)PCR和PCR-Southern檢測證實，ZM401已經(jīng)成功地整合到轉(zhuǎn)化植株基因組中。 本研究建立了新鐵炮百合、亞洲百合和東方百合的再生體系和受