糖尿病結(jié)腸動力障礙時胰島素、干細胞因子和Cajal間質(zhì)細胞的變化及胰島素的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、糖尿病結(jié)腸功能紊亂是糖尿病極為常見的并發(fā)癥之一，嚴重影響病人的生活質(zhì)量，其病因及上游調(diào)控機制目前仍不清楚。隨著Cajal間質(zhì)細胞(interstitial cells of Cajal，ICC)作為胃腸道起博細胞理論的不斷認識，愈來愈多的證據(jù)表明它可能在糖尿病結(jié)腸功能紊亂的發(fā)病中發(fā)揮重要的作用。 [目的] 1．探討糖尿病結(jié)腸慢傳輸運動大鼠結(jié)腸組織中Caial間質(zhì)細胞(interstitial cells of Caial

2、，ICC)的數(shù)量及超微結(jié)構(gòu)的變化。 2．糖尿病結(jié)腸慢傳輸運動大鼠結(jié)腸組織中干細胞因子(stem cellfactor，SCF)的變化。 3．糖尿病結(jié)腸慢傳輸運動大鼠血清中胰島素和SCF的變化。 4．不同劑量胰島素干預(yù)對糖尿病大鼠結(jié)腸運動障礙及ICC的影響。 [方法] 1．建立糖尿病大鼠結(jié)腸慢傳輸運動模型：采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(XTZ；60mg/kg)建立糖尿病大鼠模型；正常對照組注射等量的

3、檸檬酸緩沖液。①分別于成模后6、8、10周處死兩組中的部分大鼠(n=9)，用炭墨推進試驗測定大鼠胃腸通過指數(shù)；②在6周時，經(jīng)驗證已建成糖尿病慢傳輸運動模型后，分別以8、12、16U/kg<'*>d劑量、皮下注射魚精蛋白鋅胰島素干預(yù)，至10周時再用炭墨推進試驗測定大鼠胃腸通過指數(shù)，并處死所有大鼠。 2．留取所有大鼠(糖尿病組、對照組和胰島素干預(yù)組)近端結(jié)腸組織，用透射電鏡觀察大鼠結(jié)腸組織中ICC的超微結(jié)構(gòu)；免疫組化標(biāo)記結(jié)腸組織IC

4、C，計算機圖像分析所有大鼠結(jié)腸組織中c-kit陽性細胞面積的變化。 3．分別取6、8、10周時正常和糖尿病組大鼠近端結(jié)腸組織，Westen-blot檢測結(jié)腸組織中膜結(jié)合型SCF的表達情況，Real TimePCR檢測結(jié)腸組織中可溶型和膜結(jié)合型SCF mRNA的表達情況。留取6、8、10周時正常和糖尿病組大鼠血清，ELISA檢測血清中可溶型SCF濃度，放免法測血清中胰島素濃度。取10周正常組、糖尿病組和糖尿病小劑量胰島素干預(yù)組近端

5、結(jié)腸組織，Westen-blot檢測KIT蛋白表達情況。 [結(jié)果] 1．血糖值：6、8、10周時糖尿病大鼠比對照組顯著升高(P<0.05)，且隨病程延長，糖尿病組血糖有逐漸升高的趨勢(F=0.023，P>0.05)。胃腸通過指數(shù)：糖尿病組較對照組顯著降低(P<0.05)，且隨病程延長，糖尿病組胃腸通過指數(shù)有逐漸降低的趨勢(F=0.641，P>0.05)。 2．ICC超微結(jié)構(gòu)：正常大鼠結(jié)腸組織ICC有完整的基膜，沿

6、細胞膜分布的豐富的小空泡，胞質(zhì)內(nèi)細胞器豐富，以線粒體最顯著，異染色質(zhì)較多，沿核膜分布；ICC之間、與神經(jīng)元細胞、肌細胞之間形成很多的縫隙連接。建模6、8、10周時糖尿病大鼠結(jié)腸中ICC與其他細胞間的縫隙連接顯著減少、結(jié)構(gòu)破壞、連接松散；細胞器變性、減少，尤以線粒體明顯；胞質(zhì)廣泛溶解，空泡形成，且此種變化隨糖尿病時間的延長愈加顯著。 3.c-kit陽性細胞面積：與對照組比較，糖尿病組在6、8、10周時近端結(jié)腸肌間神經(jīng)叢c-kit陽

7、性細胞顯著減少(P<0.05)，隨病程延長有逐漸降低的趨勢(F=0.003，P>0.05)。 4.SCF：6、8、10周時糖尿病大鼠近端結(jié)腸組內(nèi)的膜結(jié)合型SCFmRNA和蛋白水平與對照組相比，均無顯性差異(P>0.05)；而可溶型SCF mRNA在糖尿病組明顯降低(P<0.05)，且隨病程延長愈加顯著(F=2.137，P>0.05)。 5.6、8、10周時糖尿病大鼠血清中胰島素和SCF均明顯降低(P<0.05)，且隨糖尿

8、病的延長呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(F=0.33，P>0.05和F=0.093，P>0.05)。 6.10周時，小劑量胰島素干預(yù)組(8U/kg/d)結(jié)腸ICC數(shù)量較糖尿病組增多(P<0.05)、結(jié)構(gòu)破壞情況明顯改善；胃腸通過指數(shù)也較糖尿病組明顯改善(P<0.05)；而中、大劑量胰島素干預(yù)組(12、16U/kg/d)的。ICC數(shù)量、結(jié)構(gòu)、胃腸通過指數(shù)均較糖尿病組無明顯改觀(P>0.05)。 [結(jié)論] 1.6周時糖尿病大鼠血

9、糖明顯升高、胃腸通過指數(shù)顯著降低，說明糖尿病大鼠結(jié)腸動力障礙(慢傳輸運動)已經(jīng)存在。8、10周時結(jié)腸動力障礙愈加明顯。 2.糖尿病大鼠近端結(jié)腸肌間神經(jīng)叢ICC數(shù)量明顯減少、超微結(jié)構(gòu)破壞嚴重，可能是導(dǎo)致結(jié)腸動力障礙的病理基礎(chǔ)。 3.糖尿病大鼠可溶型SCF mRNA和蛋白表達減少、胰島素水平降低，可能是引起ICC數(shù)量減少和結(jié)構(gòu)破壞的上游調(diào)控因素。 4.小劑量胰島素可顯著改善糖尿病所致ICC數(shù)量減少、結(jié)構(gòu)破壞及其結(jié)腸動