豬圓環(huán)病毒2型山東株遺傳演化分析及SD1株感染性分子克隆的構建.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科，是一種小的，無囊膜的單鏈負股環(huán)狀DNA病毒。分為無致病性的PCV1和有致病性的PCV2兩個基因型。本研究克隆了4株PCV2的全基因組，并測定了其序列，通過系統(tǒng)進化分析表明各分離毒株在進化上存在地域上的相關性，在此基礎上進一步構建了PCV2感染性分子克隆。
　　 根據(jù)GenBank中發(fā)表的豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)全基因序列，設計一對特異性引物，用PCR的方

2、法直接從在山東地區(qū)采集的血清學檢測為陽性的病料中分別擴增出4株PCV2毒株的全基因組，進行了序列測定，分別命名為SD-3，SD-4，SD-5，SD-6，并將其與課題組以前分離的兩株PCV2（SD-1、SD-2）共6株分離株進行了序列分析，結果表明:該6株毒株的全基因核苷酸序列除SD-2為1768bp外，其余均為1767bp。應用DNAStar軟件分析表明，分離自山東不同地區(qū)的這6株PCV2病毒全序列核苷酸同源性較高，達98.5％～100

3、％;與20株國內(nèi)外參考序列的核苷酸同源性為95.1％～99.7％。該6株PCV2山東分離株之間ORF1、ORF2同源性分別為:97.6％～100％，99.1％～100％;推導氨基酸同源性為:99.1％～100％，97.0％～100％。說明目前山東省流行的PCV2核苷酸序列高度保守，推導氨基酸序列同源性也較高。進化樹分析顯示，SD-5與其他五株病毒遺傳關系較遠，分屬兩個不同的大分支，SD-5與澳大利亞的分離株AY754018共同組成了一個

4、大分支;其他5株與美國、匈牙利等國分離株同屬于一個大的分支，遺傳關系較近。推測目前山東地區(qū)的流行的PCV2大部分可能來源于歐洲、北美洲等地區(qū)，也有小部分可能來源于澳大利亞等其他地區(qū)。
　　 本研究將PCV2 SD1株(GeneBank accession number:DQ346683)全基因克隆至真核表達載體pSK的SacⅡ位點中，成功構建病毒的感染性分子克隆pSK-PCV2。采用脂質(zhì)體介導法將重組質(zhì)粒pSK-PCV2轉染PK