豬圓環(huán)病毒2型山東株遺傳演化分析及SD1株感染性分子克隆的構(gòu)建.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科，是一種小的，無囊膜的單鏈負(fù)股環(huán)狀DNA病毒。分為無致病性的PCV1和有致病性的PCV2兩個基因型。本研究克隆了4株P(guān)CV2的全基因組，并測定了其序列，通過系統(tǒng)進(jìn)化分析表明各分離毒株在進(jìn)化上存在地域上的相關(guān)性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步構(gòu)建了PCV2感染性分子克隆。
　　 根據(jù)GenBank中發(fā)表的豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)全基因序列，設(shè)計一對特異性引物，用PCR的方

2、法直接從在山東地區(qū)采集的血清學(xué)檢測為陽性的病料中分別擴(kuò)增出4株P(guān)CV2毒株的全基因組，進(jìn)行了序列測定，分別命名為SD-3，SD-4，SD-5，SD-6，并將其與課題組以前分離的兩株P(guān)CV2（SD-1、SD-2）共6株分離株進(jìn)行了序列分析，結(jié)果表明:該6株毒株的全基因核苷酸序列除SD-2為1768bp外，其余均為1767bp。應(yīng)用DNAStar軟件分析表明，分離自山東不同地區(qū)的這6株P(guān)CV2病毒全序列核苷酸同源性較高，達(dá)98.5％～100

3、％;與20株國內(nèi)外參考序列的核苷酸同源性為95.1％～99.7％。該6株P(guān)CV2山東分離株之間ORF1、ORF2同源性分別為:97.6％～100％，99.1％～100％;推導(dǎo)氨基酸同源性為:99.1％～100％，97.0％～100％。說明目前山東省流行的PCV2核苷酸序列高度保守，推導(dǎo)氨基酸序列同源性也較高。進(jìn)化樹分析顯示，SD-5與其他五株病毒遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)，分屬兩個不同的大分支，SD-5與澳大利亞的分離株AY754018共同組成了一個

4、大分支;其他5株與美國、匈牙利等國分離株同屬于一個大的分支，遺傳關(guān)系較近。推測目前山東地區(qū)的流行的PCV2大部分可能來源于歐洲、北美洲等地區(qū)，也有小部分可能來源于澳大利亞等其他地區(qū)。
　　 本研究將PCV2 SD1株(GeneBank accession number:DQ346683)全基因克隆至真核表達(dá)載體pSK的SacⅡ位點中，成功構(gòu)建病毒的感染性分子克隆pSK-PCV2。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組質(zhì)粒pSK-PCV2轉(zhuǎn)染PK