熱休克蛋白47在病理性瘢痕生成中的作用機(jī)制的探討.pdf

1、研究背景對于病理性瘢痕的研究一直是整形外科乃至整個外科界的焦點(diǎn)，由于其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，至今為止仍無明確的病因?qū)W診斷，也沒有一種普遍有效的治療方法。大量研究結(jié)果表明，膠原蛋白的異常合成與沉積是許多纖維化反應(yīng)疾病的病理基礎(chǔ)，同時也是病理性瘢痕形成的重要原因。 熱休克蛋白47(heatshockprotein，HSP47)是一種分子量為47KD的熱休克蛋白，屬于小分子量HSP家族。HSP47存在于膠原蛋白分泌細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)內(nèi)，

2、與前膠原特異性結(jié)合，參與前膠原的折疊、裝配、修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程，被認(rèn)為是膠原特異性分子伴侶，在膠原合成及纖維化病理過程中發(fā)揮著重要作用。國外有多項研究證實，抑制HSP47的表達(dá)，可抑制膠原合成，減弱纖維化程度。如在腎小球腎炎大鼠模型以及大鼠切口愈合實驗中，局部注入HSP47反義寡核苷酸，可有效減輕了腎小球硬化的程度，并可抑制切口愈合的瘢痕形成反應(yīng)。 隨著基因工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，使得基因治療成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域全新的治療手段，這樣，對于病理

3、性瘢痕的基因治療研究也就成為目前整形外科界研究的熱點(diǎn)問題，也是從根本上治療病理性瘢痕的手段。 研究方法本研究應(yīng)用RNA干擾、實時熒光定量PCR、質(zhì)粒構(gòu)建、免疫組織化學(xué)染色、天狼星紅偏振光顯色、HP比色法及Westernblot等技術(shù)，在比較研究病理性瘢痕與正常皮膚組織中HSP47基因功能狀態(tài)差異的基礎(chǔ)上，設(shè)計并構(gòu)建含有特異性干擾HSP47mRNA片段的質(zhì)粒，分析比較在選擇性沉默HSP47基因表達(dá)前后，瘢痕疙瘩原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞中

4、與膠原蛋白合成及分泌相關(guān)的機(jī)能狀況的改變。 研究結(jié)果通過組織學(xué)染色及熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)，與正常皮膚相比，HSP47在病理性瘢痕中呈現(xiàn)異常增高的表達(dá)狀態(tài)，差別有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；并且與膠原蛋白的沉積量呈現(xiàn)正向相關(guān)關(guān)系(r=0.386，P＜0.05)。經(jīng)HSP47siRNA表達(dá)載體特異性沉默瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中HSP47基因表達(dá)后，我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白的合成以及細(xì)胞外膠原蛋白的分泌均明顯受到抑制。 研究結(jié)論在

5、病理性瘢痕的生成過程中，成纖維細(xì)胞內(nèi)HSP47基因過度表達(dá)，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生超出常量的mRNA并翻譯為HSP47蛋白，正是由于大量的HSP47蛋白聚集于成纖維細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)，就使得前膠原的折疊、裝配、修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程異常加快和增多，從而導(dǎo)致膠原蛋白的合成及分泌量明顯增加，這樣，過多的膠原蛋白過度的儲留于皮膚真皮層中，造成了真皮層膠原基質(zhì)異常增生并最終形成瘢痕疙瘩。HSP47基因高表達(dá)促進(jìn)瘢痕疙瘩生成這一機(jī)制的闡明，為我們提供了抑制瘢痕疙瘩形成的