矽肺早期BALF中炎性因子變化規(guī)律的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　 觀察染塵大鼠早期肺組織病理改變,分析炎性細(xì)胞和炎性因子的變化規(guī)律,探討其與病理改變的關(guān)系,確定矽肺早期炎性生物標(biāo)志物。
　　 研究方法：
　　 選擇Wistar雄性大鼠168只,隨機(jī)分成對照組、15、30、60 mg/ml染塵劑量組,采用非氣管暴露法建立矽肺模型。染塵后1、3、7、14、21、28d每組分別取7只處死,取其肺組織做HE染色,觀察其病理改變;同時(shí)收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),計(jì)

2、數(shù)BALF中炎性細(xì)胞的總數(shù)及分類比例,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1、IL-6、IL-16、MIP-1α、MCP-1、TGF-β)及一氧化氮及其衍生物(硝酸鹽/亞硝酸鹽、硝化酪氨酸)的含量。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.染塵后大鼠體重及其臟器系數(shù)的變化
　　 染塵前各組大鼠體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),染塵后第7d開始染塵組大鼠較對照組下降,至28d各染塵劑量組大鼠體重

3、明顯低于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而高、中、低劑量組問差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。染塵后大鼠肺臟器系數(shù)在各時(shí)間點(diǎn)均高于對照組(P＜0.05),在7d、14d、21d,28d肺臟器系數(shù)隨染塵劑量的增加而增加,存在較好的劑量反應(yīng)關(guān)系。
　　 2.肺組織的病理改變觀察
　　 對照組肺組織,1-3d出現(xiàn)充血、水腫,炎性細(xì)胞增多,7d炎癥逐漸消失,14d后肺組織基本恢復(fù)正常。染塵劑量組肺組織,1-3d出現(xiàn)充血,炎性細(xì)胞浸潤;

4、7d肺泡間隔增寬水腫明顯,炎性細(xì)胞聚集,主要表現(xiàn)為巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞;14d部分肺組織結(jié)構(gòu)破壞;21d肺泡結(jié)構(gòu)大部分破壞,炎性細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞;28d肺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,偶見成纖維細(xì)胞。
　　 3.染塵大鼠炎性細(xì)胞變化
　　 大鼠BALF中自細(xì)胞總數(shù),在1、3、21、28d染塵組較對照組明顯增高,高劑量組差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);在7d、14d染塵組白細(xì)胞總數(shù)較對照組降低。
　　 染塵大鼠BALF

5、中各劑量組各時(shí)間點(diǎn)BALF中巨噬細(xì)胞數(shù)低于對照組,但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各劑量組中性粒細(xì)胞在1～7d較對照組明顯增高(P＜0.05),而14～28d較對照組略有下降,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;淋巴細(xì)胞1～7d與對照組之間無差異,在14～28d較對照組明顯增高(P＜0.05);各劑量組各時(shí)間點(diǎn)塵細(xì)胞數(shù)均較對照組明顯增高(P＜0.05),且隨著染塵劑量的增加塵細(xì)胞有增加的趨勢。
　　 4.BALF中炎性因子變化
　　 細(xì)胞因子(TNF

6、-α、IL-1、IL-6、IL-16、MIP-1α、MCP-1、TGF-β)和一氧化氮及其衍生物(NO2-/NO3-和硝化酪氨酸)濃度在各時(shí)間點(diǎn)各劑量組較對照組均有不同程度的增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),均在14d均達(dá)到高峰值。IL-1、TNF-α早期差異變化顯著,劑量反應(yīng)關(guān)系明顯,IL-6、IL-16、TGF-β后期差異變化顯著,MCP-1與炎性細(xì)胞變化趨勢一致,MIP-1α與其他細(xì)胞因子相關(guān)性顯著(P＜0.01);NO2-

7、/NO3-劑量反應(yīng)關(guān)系明顯,硝化酪氨酸劑量反應(yīng)關(guān)系不明但兩者相關(guān)性顯著。
　　 研究結(jié)論：
　　 1.在染塵大鼠早期(1～28d),大鼠肺組織病理改變主要表現(xiàn)為:炎性細(xì)胞浸潤聚集,肺泡間隔增厚,纖維組織開始增生,肺泡正常組織發(fā)生改變。
　　 2.染塵大鼠早期毛要表現(xiàn)為炎癥反應(yīng),炎癥細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和塵細(xì)胞)呈規(guī)律變化,且塵細(xì)胞具有較好的劑量-反應(yīng)關(guān)系。
　　 3.IL-1、TNF-α早

8、期變化明顯,主要參與早期的炎癥反應(yīng);IL-6、IL-16、TGF-β后期變化明顯,促進(jìn)肺組織纖維化的發(fā)展;MCP-1和MIP-1α2種趨化因子與炎性細(xì)胞及其他細(xì)胞因子有很好的相關(guān)性,在矽肺的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。以上細(xì)胞因子作為矽肺早期檢測生物標(biāo)志物具有可行性。NO2-/NO3-含量變化與矽肺炎癥過程有很好的同步性,且有較好的劑量反應(yīng)關(guān)系,可作為矽肺早期炎性標(biāo)志物;硝化酪氨酸含量變化晚于NO2-/NO3-,劑量-反應(yīng)關(guān)系不明顯,可以