單核細(xì)胞趨化因子在卡介苗誘導(dǎo)膀胱局部抗腫瘤免疫反應(yīng)中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的:探討單核細(xì)胞趨化因子(MCP-1)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)細(xì)胞增殖的作用以及能否增加TIL對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性,觀察卡介苗(BCG)膀胱灌注治療后,膀胱腫瘤中單核細(xì)胞趨化因子(MCP-1)鐘聲蛋白樣受體(TLR4,TLR2),以及核轉(zhuǎn)錄因子κB(NFκB)的表達(dá),進(jìn)而討論MCP-1在BCG誘導(dǎo)的膀胱腫瘤的局部抗瘤免疫反應(yīng)中的具體過(guò)程和機(jī)制.方法:用Rosenberg<'[1]>的方法從膀胱癌組織中分離TIL.體外在IL-2

2、和MCP-1作用下培養(yǎng)TIL,用細(xì)胞記數(shù)法測(cè)定細(xì)胞增殖.觀察在不同濃度的MCP-1的作用下,不同時(shí)間相對(duì)應(yīng)的TIL增殖的變化;于體外在IL-2和MCP-1作用下培養(yǎng)TIL作為效應(yīng)細(xì)胞,以膀胱癌細(xì)胞系EJ作為靶細(xì)胞,用MTT釋放實(shí)驗(yàn)測(cè)定TIL對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒殺傷作用;用MTT法[2]測(cè)定不同濃度的MCP-1作用后的TIL細(xì)胞毒性的影響.收集膀胱腫瘤電切(TUR)術(shù)標(biāo)本,分別提取標(biāo)本組織中的總RNA,用MCP-1,TLR4,TLR2,NF

3、κB的寡核苷酸引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后,用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)原發(fā)膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本、正常膀胱黏膜以及BCG灌注治療后膀胱移行細(xì)胞癌復(fù)發(fā)標(biāo)本中MCP-1,TLR4,TLR2,NFκB mRNA的表達(dá);用免疫組化的方法測(cè)定NFκB(P65)在各標(biāo)本中的表達(dá).結(jié)論:一定濃度的MCP-1可促進(jìn)TIL細(xì)胞的增殖,并可增加TIL對(duì)EJ細(xì)胞的細(xì)胞毒性.膀胱腫瘤電切術(shù)后,經(jīng)BCG灌注治療,其復(fù)發(fā)腫瘤標(biāo)本中MCP-1,TLR4,TL