雞傳染性法氏囊病毒Harbin-1毒株A節(jié)段基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、由傳染性法氏囊病毒引起的傳染性雞傳染性法氏囊病是影響?zhàn)B雞業(yè)的重大疫病。病毒的不斷變異和超強(qiáng)毒株的出現(xiàn)使得傳統(tǒng)疫苗難以起作用。感染、亞臨床感染造成的免疫抑制，給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在分子水平上揭示病毒的致病機(jī)理及生產(chǎn)亞單位疫苗將有助于預(yù)防該病毒的傳播與擴(kuò)散。為此，本實(shí)驗(yàn)利用利用超強(qiáng)毒株Harbin-1和強(qiáng)毒株TS的A節(jié)段基因序列分別構(gòu)建含不同的病毒基因組分的原核表達(dá)載體pET30agfpvp2、pET30agfpvp5、pET30a

2、gfpvp2-vp4-vp3，和酵母表達(dá)載體pPICvp2、pPKICvp2-vp4-vp3，以了解病毒基因表達(dá)特性和表達(dá)蛋白的功能。pET30agfpvp2、pET30agfpvp2-vp4-vp3表達(dá)產(chǎn)物多以包含體的形式存在。經(jīng)SDS—PAGE考馬斯亮藍(lán)染色，熒光蛋白分析、western blot、 ELISA檢測(cè)，確定所構(gòu)建的5個(gè)載體都表達(dá)了目標(biāo)蛋白。SDS-PAGE考馬斯亮監(jiān)染色，熒光蛋白分析、免疫印跡結(jié)果顯示VP2的成熟過(guò)程是

3、一個(gè)自我裂解過(guò)程，不需要VP4．的參與，在pVP2的羧基端的至少有5個(gè)裂解位點(diǎn)，氨基端也存在裂解位點(diǎn)，成熟的VP2相對(duì)分子量大小約3 4 kDa而不是報(bào)道的37-41 kDa；western blot的結(jié)果顯示加工過(guò)程產(chǎn)生20kD肽也參與病毒粒子的組裝。此外，初步證實(shí)了病毒的A節(jié)段基因的ORF2起始密碼子區(qū)域可能是翻譯調(diào)控區(qū)。 兩種表達(dá)系統(tǒng)所得劍的表達(dá)產(chǎn)物均能與病毒的剛性血清特異反應(yīng)，表明所得到的表達(dá)蛋白具有抗體的反應(yīng)原性，是否