子宮內(nèi)膜癌微血管內(nèi)皮細胞放射敏感性相關基因篩選.pdf

1、[目的]
　　 腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關，血管生成被認為是腫瘤生長和浸潤轉(zhuǎn)移的形態(tài)學基礎。血管內(nèi)皮細胞是腫瘤血管最重要的組成部分，內(nèi)皮細胞的激活在血管生成機制的啟動發(fā)揮關鍵作用。近年來，研究報道，腫瘤對放射線的敏感性主要取決于腫瘤血管內(nèi)皮細胞而非腫瘤細胞。通過研究與腫瘤血管內(nèi)皮細胞放射敏感相關基因，有助于個體化治療方案的制定及探討增強放射治療敏感性的措施。本研究利用基因芯片技術檢測子宮內(nèi)膜癌中血管內(nèi)皮細胞與放射敏感相關

2、基因表達譜，通過數(shù)據(jù)分析篩選與子宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮細胞放射敏感相關基因，為子宮內(nèi)膜癌放射增敏及抗血管生成治療提供新的靶點。
　　 [方法]
　　 無菌條件下取出新鮮子宮內(nèi)膜癌標本，針芯研磨制成單細胞懸液。將制各好的單細胞懸液與磁珠結(jié)合提取血管內(nèi)皮細胞并進行原代培養(yǎng)。6MV400 cGyX線對原代血管內(nèi)皮細胞進行照射，并觀察細胞照射前后形態(tài)學變化變化。使用北京博奧生物有限公司的人類全基因組表達譜芯片檢測6Gy X線照射前后子

3、宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮原代細胞的基因表達譜，篩選照射前后的差異表達基因。通過分析X線照射前后細胞株的基因變化以獲得由X射線引起的差異表達基因。隨機挑選4個2倍以上的差異基因，使用相對實時定量熒光PCR驗證芯片的基因改變，以確定芯片檢測結(jié)果的是否可靠。
　　 [結(jié)果]
　　 提取的原代人子宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮細胞通過免疫熒光技術證實表達內(nèi)皮細胞特異性標志物vWF及CD31。通過基因表達譜共篩選出共同的有意義差異表達基因68條，其中共

4、同上調(diào)/下調(diào)的基因41條，上調(diào)23條，下調(diào)為18條，涉及細胞凋亡，細胞信號傳導，細胞粘附，細胞應激，血管生成，DNA損傷與修復和細胞周期調(diào)節(jié)等多種細胞調(diào)節(jié)機制。MMP9、THBS1、ECGF1與CXCL12基因通過實時定量熒光PCR驗證證實了芯片檢測結(jié)果的可靠性。
　　 [結(jié)論]
　　 血管內(nèi)皮細胞放射敏感性基因表達譜的篩選與鑒定，為子宮內(nèi)膜癌放射治療與抗血管生成靶向治療提供新的靶點。通過在體外研究子宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮細胞