子宮內(nèi)膜癌微血管內(nèi)皮細(xì)胞放射敏感性相關(guān)基因篩選.pdf

1、[目的]
　　 腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與血管生成密切相關(guān)，血管生成被認(rèn)為是腫瘤生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。血管內(nèi)皮細(xì)胞是腫瘤血管最重要的組成部分，內(nèi)皮細(xì)胞的激活在血管生成機(jī)制的啟動(dòng)發(fā)揮關(guān)鍵作用。近年來，研究報(bào)道，腫瘤對(duì)放射線的敏感性主要取決于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞而非腫瘤細(xì)胞。通過研究與腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞放射敏感相關(guān)基因，有助于個(gè)體化治療方案的制定及探討增強(qiáng)放射治療敏感性的措施。本研究利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌中血管內(nèi)皮細(xì)胞與放射敏感相關(guān)

2、基因表達(dá)譜，通過數(shù)據(jù)分析篩選與子宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮細(xì)胞放射敏感相關(guān)基因，為子宮內(nèi)膜癌放射增敏及抗血管生成治療提供新的靶點(diǎn)。
　　 [方法]
　　 無菌條件下取出新鮮子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本，針芯研磨制成單細(xì)胞懸液。將制各好的單細(xì)胞懸液與磁珠結(jié)合提取血管內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)行原代培養(yǎng)。6MV400 cGyX線對(duì)原代血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行照射，并觀察細(xì)胞照射前后形態(tài)學(xué)變化變化。使用北京博奧生物有限公司的人類全基因組表達(dá)譜芯片檢測(cè)6Gy X線照射前后子

3、宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮原代細(xì)胞的基因表達(dá)譜，篩選照射前后的差異表達(dá)基因。通過分析X線照射前后細(xì)胞株的基因變化以獲得由X射線引起的差異表達(dá)基因。隨機(jī)挑選4個(gè)2倍以上的差異基因，使用相對(duì)實(shí)時(shí)定量熒光PCR驗(yàn)證芯片的基因改變，以確定芯片檢測(cè)結(jié)果的是否可靠。
　　 [結(jié)果]
　　 提取的原代人子宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮細(xì)胞通過免疫熒光技術(shù)證實(shí)表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物vWF及CD31。通過基因表達(dá)譜共篩選出共同的有意義差異表達(dá)基因68條，其中共

4、同上調(diào)/下調(diào)的基因41條，上調(diào)23條，下調(diào)為18條，涉及細(xì)胞凋亡，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞粘附，細(xì)胞應(yīng)激，血管生成，DNA損傷與修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)等多種細(xì)胞調(diào)節(jié)機(jī)制。MMP9、THBS1、ECGF1與CXCL12基因通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR驗(yàn)證證實(shí)了芯片檢測(cè)結(jié)果的可靠性。
　　 [結(jié)論]
　　 血管內(nèi)皮細(xì)胞放射敏感性基因表達(dá)譜的篩選與鑒定，為子宮內(nèi)膜癌放射治療與抗血管生成靶向治療提供新的靶點(diǎn)。通過在體外研究子宮內(nèi)膜癌血管內(nèi)皮細(xì)胞