色素痣細胞體外培養(yǎng)和構建含痣細胞的組織工程皮膚.pdf

1、目的: 在體外對色素痣細胞（nevus cell）進行培養(yǎng)，并構建含痣細胞的組織工程皮膚。
　　方法: 1．采用兩步酶消化法處理色素痣，棄表皮后，用0.2％Ⅳ型膠原酶溶液消化真皮，獲得細胞懸液，用完全黑素細胞培養(yǎng)基M-254培養(yǎng)痣細胞，G418純化后傳代。2．將痣細胞傳至第3代，制作細胞爬片，1天后進行S-100、NSE、HMB-45免疫組化染色。3．制備人去表皮的真皮(DED)，將第3代痣細胞制成細胞懸液，接種于DED表面，采用

2、液下培養(yǎng)3天后，取培養(yǎng)的組織工程皮膚分別做HE染色、S-100、NSE免疫組化染色。
　　結果: 1.在體外成功培養(yǎng)出痣細胞，倒置顯微鏡下觀察呈樹枝狀，折光性強，痣細胞爬片1天后，行S-100、NSE、HMB-45免疫組化染色陽性。2.第3代痣細胞消化后接種于DED，接種痣細胞后3天肉眼觀察DED表面光滑，顏色無明顯變化，未見突起的增生物。3.培養(yǎng)3天后取出培養(yǎng)的組織工程皮膚，行HE染色顯示痣細胞胞質呈藍染，少部分可見黑素顆粒，免