HaCaT細(xì)胞與黑素細(xì)胞體外構(gòu)建含黑素的組織工程皮膚.pdf

1、目的：探究用永分化的人角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）和黑素細(xì)胞（Melanocytes,MCs）混合培養(yǎng)接種于去表皮的真皮(De-epidermized dermis,DED)，體外構(gòu)建含黑素的組織工程皮膚。
　　方法：1．采用兩步酶消化法處理健康小兒包皮，獲得表皮細(xì)胞懸液，用改良的M254黑素細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)MCs。2．將中國醫(yī)科大學(xué)饋贈的HaCaT細(xì)胞復(fù)蘇。3.分別將HaCaT、MCs傳至第3代。4．將培養(yǎng)第3代的HaCaT、MCs

2、細(xì)胞以10：1比例制作細(xì)胞爬片，1天后進(jìn)行 Masson-Fontana染色。5.制備人去表皮的真皮(DED)，分別將培養(yǎng)第3代的HaCaT、MCs制成細(xì)胞懸液，按照10：1的比例接種于DED表面，采用液下培養(yǎng)3天后，改為空氣一液面培養(yǎng)相結(jié)合的方式進(jìn)行培養(yǎng)，每3天換液一次，2周后取培養(yǎng)的組織工程皮膚分別做 HE染色、硫酸亞鐵染色、HMB45和角蛋白免疫組化鑒定并取先前做過的KCs和MCs共培養(yǎng)的工程皮膚做比較。
　　結(jié)果：1. H

3、aCaT、 MCs混合培養(yǎng)于爬片1天后，于倒置顯微鏡下觀察到HaCaT呈鋪路石狀生長，其間散布MCs，MCs樹突延伸到HaCaT細(xì)胞間。2.兩種細(xì)胞混合接種于DED，15天后HE染色顯示在DED上有3～6層表皮細(xì)胞,并可見角質(zhì)層,角蛋白免疫組化染色陽性，硫酸亞鐵染色顯示全角質(zhì)層可見散在黑素著色。
　　結(jié)論：MCs、HaCaT混合接種于細(xì)胞爬片中可構(gòu)建MCs和HaCaT接觸生長的單細(xì)胞層，將MCs、HaCaT接種于DED可構(gòu)建含有黑