hCdc14A在人垂體瘤中的表達(dá)及作用機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　垂體由解剖和功能兩部分組成:垂體前葉即腺垂體，垂體后葉即神經(jīng)垂體。腺垂體協(xié)調(diào)下丘腦以及外周內(nèi)分泌器官的信號(hào)，是調(diào)節(jié)外周內(nèi)分泌器官激素分泌的最重要樞紐。垂體瘤是神經(jīng)外科常見(jiàn)的腫瘤，目前認(rèn)為其源自腺垂體實(shí)質(zhì)細(xì)胞，約占顱內(nèi)腫瘤的10％-15％。而腺垂體可分泌多種激素，源自腺垂體實(shí)質(zhì)細(xì)胞的垂體瘤因異常分泌激素而引起相關(guān)癥狀。催乳素瘤分泌催乳素，導(dǎo)致性功能減退和溢乳癥;促甲狀腺激素瘤可以引起甲狀腺功能亢進(jìn);促腎上腺皮質(zhì)激素瘤

2、可分泌促腎上腺皮質(zhì)激素，從而導(dǎo)致Cushing綜合征;生長(zhǎng)激素瘤分泌生長(zhǎng)激素，引起巨人癥和肢端肥大癥;促性腺激素瘤因很少分泌活性的促黃體激素和卵泡刺激素而出現(xiàn)的性功能亢進(jìn)，大部分促性腺激素瘤分泌的激素沒(méi)能引起病人無(wú)明顯臨床表現(xiàn)而被認(rèn)為是無(wú)功能瘤;其它的無(wú)功能瘤不分泌已知的激素。垂體瘤雖然呈良性生長(zhǎng)，但是約50％的腫瘤侵襲臨近的結(jié)構(gòu)如硬腦膜、視神經(jīng)及骨質(zhì)而被認(rèn)為是侵襲性垂體瘤。
　　現(xiàn)已知垂體瘤不是增殖的垂體細(xì)胞，而是腫瘤細(xì)胞。垂體

3、瘤的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和其它良性腫瘤相似。大多數(shù)不同表型的垂體腺瘤，包括激素活躍型腺瘤及非功能性腺瘤，盡管在一些垂體瘤中含有多個(gè)腫瘤集落，但這些集落起源于不同細(xì)胞，說(shuō)明垂體瘤具有單克隆性，是來(lái)源于一個(gè)發(fā)生了基因改變的多能干細(xì)胞。
　　CCDN1編碼細(xì)胞周期素D1，是垂體瘤的可能癌基因，細(xì)胞周期素D可以激活細(xì)胞周期素D依賴性激酶CDK4和CDK6，CDK4和CDK6可以嶙酸化Rb抑癌基因蛋白。磷酸化的Rb不再結(jié)合S期轉(zhuǎn)錄因子E2F，使細(xì)

4、胞進(jìn)入S期。
　　P53抑癌基因突變?cè)谌祟惸[瘤中最常見(jiàn)，被認(rèn)為與50％的癌種有關(guān)。其基因產(chǎn)物半衰期很短，用免疫組化的方法在正常組織中很難檢測(cè)到;但突變基因的產(chǎn)物半衰期較長(zhǎng)。其檢測(cè)陽(yáng)性率隨之增高P53表達(dá)和垂體瘤侵襲性相關(guān)，且只在侵襲性腫瘤中表達(dá)，可作為與垂體瘤的侵襲性有關(guān)的一個(gè)標(biāo)志。
　　Cdc14幾乎存在于所有的真核生物中，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Cdc14基因編碼的蛋白是雙特異性絲/蘇氨酸磷酸酶蛋白家族的新成員，大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)Cdc14

5、可逆轉(zhuǎn)Cdk活性，在芽殖酵母細(xì)胞有絲分裂退出蛋白網(wǎng)絡(luò)中起關(guān)鍵性作用。人類中存在兩種Cdc14的同源物，分別稱為hCdc14A、hCdc14B，兩者有50％的序列同源性。hCdc14A蛋白水平的變化可導(dǎo)致細(xì)胞染色體分離和胞漿分裂的異常，從而影響細(xì)胞周期的正常運(yùn)行。并且該蛋白表達(dá)量的異常，還伴隨出現(xiàn)形態(tài)異常的細(xì)胞。HCdc14A可能通過(guò)對(duì)Erk3去磷酸化對(duì)抗其在細(xì)胞周期調(diào)控中的負(fù)性作用，進(jìn)而也對(duì)抗了Cdk的磷酸化作用。同時(shí)，也可能通過(guò)穩(wěn)定或

6、增加Erk3與cyclinD3復(fù)合物，在細(xì)胞增殖中發(fā)揮一定作用。研究表明野生型P53腫瘤細(xì)胞中hCdc14A蛋白的表達(dá)水平明顯低于突變的P53腫瘤細(xì)胞中的hCdc14A表達(dá)量，提示在野生型P53腫瘤細(xì)胞中可能存在某種機(jī)制，抑制hCdc14A的高表達(dá)，以保護(hù)P53的作用。所以認(rèn)為hCdc14A的高表達(dá)可以抑制P53活性，從而使細(xì)胞周期阻止以及細(xì)胞的凋亡作用異常。
　　hCdc14A在垂體瘤中的表達(dá)情況及其作用還沒(méi)有文獻(xiàn)研究。本實(shí)驗(yàn)研

7、究目的是:通過(guò)免疫組織細(xì)胞化學(xué)觀察hCdc14A及P53蛋白在人垂體瘤病理標(biāo)本中的表達(dá)情況，研究hCdc14A及P53蛋白表達(dá)與垂體瘤類型、腫瘤侵襲性等臨床預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性，探討hCdc14A蛋白在人垂體瘤發(fā)病中的作用。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　垂體瘤標(biāo)本:選自2012.6-2012.12浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)外科垂體瘤手術(shù)標(biāo)本。收集患者臨床資料如患者年齡、性別、臨床癥狀、垂體內(nèi)分泌激素水平、腫瘤組織病理類型、影像學(xué)資料

8、包括腫瘤大小及腫瘤生長(zhǎng)有無(wú)鞍外侵襲等。鞍外侵襲性指垂體瘤影像學(xué)表現(xiàn)不局限于鞍內(nèi)，向鞍上或鞍旁生長(zhǎng)。侵襲性垂體腺瘤的判斷標(biāo)準(zhǔn):①采用Wilson改良的Hardy分類法，將Ⅲ、Ⅳ級(jí)或C、D、E期的腫瘤歸為侵襲性腺瘤;②術(shù)前影像學(xué)改變，CT及MR可見(jiàn)海綿竇、鞍旁及下丘腦等鄰近結(jié)構(gòu)的破壞;③術(shù)中所取鞍底骨質(zhì)、鞍底硬腦膜經(jīng)病理學(xué)證實(shí)有腫瘤細(xì)胞侵犯;④術(shù)中見(jiàn)鞍底骨質(zhì)及硬腦膜被侵襲破壞，腫瘤突入蝶竇腔或海綿竇內(nèi)壁穿通，竇內(nèi)結(jié)構(gòu)被腫瘤包繞或腫瘤長(zhǎng)入鞍周

9、侵犯腦組織。
　　正常人垂體組織:取自浙江大學(xué)解剖教研室，共2例，排除內(nèi)分泌相關(guān)疾患。
　　采用免疫組織化學(xué)和Western blot檢測(cè)hCdc14A及P53在垂體瘤及正常垂體組織中的表達(dá)水平，統(tǒng)計(jì)分析hCdc14A的表達(dá)情況與垂體瘤類型間的關(guān)系，hCdc14A的表達(dá)與P53表達(dá)是否存在一致性。
　　結(jié)果：
　　1病例資料:
　　43例垂體瘤患者中男性19例，年齡為28-73歲，平均年齡為47.6±12.

10、8歲;女性24例，年齡為25-68歲，平均年齡為47.3±12.4歲。功能性垂體瘤共:27例，其中，促腎上腺激素腺(ACTH)瘤5例，生長(zhǎng)激素(GH)腺瘤4例，促卵泡刺激素(FSH)腺瘤1例，催乳素(PRL)細(xì)胞腺瘤9例，多分泌功能細(xì)胞腺瘤9例（其中ACTH/FSH細(xì)胞腺瘤1例， FSH/ACTH細(xì)胞腺瘤1例，GH/FSH細(xì)胞腺瘤1例，GH/PRL細(xì)胞腺瘤2例，PRL/ACTH細(xì)胞腺瘤2例，TSH/PRL細(xì)胞腺瘤1例），無(wú)內(nèi)分泌功能腺瘤

11、16例。按Hardy分類法GradeⅠ(微腺瘤，直徑＜10mm)11例，GradeⅡ(包膜完整的大腺瘤，直徑≥10mm)5例，GradeⅢ(侵入蝶竇或海綿竇)17例，GradeⅣ(侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)或顱外轉(zhuǎn)移)10例。按侵襲性分類，侵襲性垂體瘤16例，非侵襲垂體瘤27例。
　　2 hCdc14A在垂體瘤中的表達(dá)情況:
　　正常垂體組織未見(jiàn)hCde14A陽(yáng)性表達(dá)。垂體瘤組織中hCdc14A陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于正常垂體組織(P＜0.

12、01)。復(fù)制分裂行為旺盛的侵襲性高的垂體瘤細(xì)胞的陽(yáng)性水平高于正常垂體細(xì)胞(P＜0.01)或者非侵襲性低的垂體瘤細(xì)胞(P＜0.01)。功能性與非功能性垂體瘤中，hCdc14A陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3 P53在垂體瘤中的表達(dá)情況:
　　本組43例病例中，P53陽(yáng)性表達(dá)率為18.6％(8/43)，在正常垂體及非襲性垂體瘤組織中，均未見(jiàn)P53陽(yáng)性表達(dá)。侵襲性垂體瘤中，P53陽(yáng)性表達(dá)率為29.6％(8

13、/27)。侵襲性垂體瘤P53陽(yáng)性表達(dá)水平高于正常垂體細(xì)胞(P＜0.01）及非侵襲性垂體瘤細(xì)胞(P＜0.01)。功能性與非功能性垂體瘤中，P53陽(yáng)性率比較，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Weston-Blot分析提示:高表達(dá)hCdc14A的侵襲性垂體瘤中，均可見(jiàn)P53陽(yáng)性表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　hCdc14A在垂體瘤中廣泛表達(dá)，且其表達(dá)水平和垂體瘤的侵襲性密切相關(guān)，而與垂體瘤是否為功能性無(wú)密切關(guān)系，提示hCdc14A在垂體