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1、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;解放軍總醫(yī)院博士學(xué)位論文Math1基因誘導(dǎo)成年大鼠前庭毛細(xì)胞再生的在體實(shí)驗(yàn)研究姓名:徐金操申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師:黃德亮;楊仕明20090514軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文一、新霉素對(duì)大鼠前庭毛細(xì)胞毒性作用的實(shí)驗(yàn)研究目的:研究新霉素對(duì)大鼠前庭毛細(xì)胞的毒性作用,為藥物性前庭功能障礙動(dòng)物模型的建立和相關(guān)研究提供參考。方法:將1 5 只成年W i s t a r 大鼠分為正常對(duì)照組、新霉素組和人工外淋巴液組,新
2、霉素組大鼠在右耳通過(guò)耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階打孔的方法在耳蝸內(nèi)注入0 .1 %( ∥1 0 0 m 1 ) 新霉素5 u l ,人工外淋巴液組按同樣方法注入人工外淋巴液5 u l 。正常對(duì)照組大鼠不做任何處理。處理3 天后對(duì)動(dòng)物進(jìn)行頸髓硬膜外短聲誘發(fā)電位- ( c l i c k - e v o k e d p o t e n t i a l s O nt h es u r f a c eo ft h ec e r v i c a ld u r a
3、m a t e r , C D M .C E P ) 檢查和游泳試驗(yàn),來(lái)評(píng)價(jià)前庭功能,然后將動(dòng)物處死,進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果:3 天后新霉素組大鼠的前庭毛細(xì)胞即出現(xiàn)毀滅性破壞,并出現(xiàn)嚴(yán)重的前庭功能障礙。正常對(duì)照組大鼠的游泳時(shí)間為4 .0 4 - 0 .7 1 s ,新霉素組大鼠的游泳時(shí)間為1 0 .2 4 - 1 .6 4 s ,人工外淋巴液組大鼠的游泳時(shí)間為4 .4 4 - 1 .1 4 s 。在短聲( C l i c k ) 刺激
4、下,正常大鼠引出C D M .C E P 的閾值為8 5 4 - 3 .5 4d B ( S P L ) ,閾值時(shí)的潛伏期為6 .5 9 :t :0 .4 1 s ;新霉素組大鼠1 2 0 d B ( S P L ) 仍無(wú)法引出C D M .C E P ;人工外淋巴液組大鼠引出C D M —C E P 的閾值為9 0 4 - 5 .0 d B ( S P L ) ,閾值時(shí)的潛伏期為6 .6 8 4 - 0 - 3 1 s 。結(jié)論:新霉素
5、對(duì)大鼠前庭毛細(xì)胞具有毀滅性的破壞作用,新霉素耳蝸內(nèi)注射的方法可以建立理想的前庭功能障礙動(dòng)物模型。二、基因?qū)氪笫笄巴サ姆椒癆 d .M a t h l 內(nèi)耳應(yīng)用的安全性研究目的:探索前庭基因?qū)氲姆椒ê屯緩?,并?duì)A d - M a t h l 的安全性進(jìn)行研究,為前庭功能障礙基因治療的相關(guān)研究提供參考。方法:將2 5 只成年W i s m r大鼠分為正常對(duì)照組、缺失E l 、E 3 基因且構(gòu)建有M a t h l 基因和綠色熒光蛋白報(bào)
6、告基因的復(fù)制缺陷型腺病毒( a d n o v i r u s .M a t h l .e n h a n c e d g r e e nf l u o r e s c e n c e p r o t e i n ,A d .M a t h l 一E G F P ) 鼓階導(dǎo)入組和前庭階導(dǎo)入組。A d - M a t h l .E G F P 導(dǎo)入組大鼠在右耳通過(guò)耳蝸底轉(zhuǎn)鼓階或前庭階打孔的方法導(dǎo)入物理滴度為2 .I x1 0 1 1 V
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