骨髓間充質(zhì)干細胞與血管內(nèi)皮生長因子聯(lián)合移植對大鼠創(chuàng)傷性腦損傷修復(fù)的研究.pdf

1、目的：
　　 1、初步探討聯(lián)合移植骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)對創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)大鼠腦組織中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的影響。
　　 2、初步探討聯(lián)合移植BMSCs和VEGF對TBI大鼠的治療作用。
　　 3、為進一步研究BMSCs移植治療TBI奠定實驗基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1、SD大鼠40只，隨機分為單獨移植BMSCs組、單獨應(yīng)用VEGF組、聯(lián)

2、合移植組及對照組4組，每組10只。采用改良的Feeny自由落體撞擊法建造中度TBI模型。
　　 2、SD大鼠2只，取股骨骨髓，應(yīng)用物理性貼壁富集法體外培養(yǎng)BMSCs。
　　 3、造模后1周，分別將等量BMSCs、VEGF、BMSCs加VEGF及PBS液立體定向移植到相應(yīng)組別大鼠的損傷腦組織周邊。
　　 4、移植2周后處死取腦。采用HE及尼氏染色法觀察腦組織病理學(xué)變化；采用免疫組化染色，應(yīng)用Imagepro-Plu

3、s6.0軟件測量半暗帶及健側(cè)對稱部位BDNF陽性表達區(qū)域的總和累積光密度(IOD)，以10個隨機不連續(xù)視野總和IOD的平均值代表該部位BDNF含量。
　　 5、統(tǒng)計學(xué)處理：總和IOD均值為計量資料，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示。實驗組半暗帶與對照組半暗帶總和IOD均值間的比較采用單因素方差分析后最小顯著差(LSD)t檢驗，各組半暗帶與對稱部總和IOD均值間的比較采用配對t檢驗。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。應(yīng)用SPSS13

4、.0統(tǒng)計軟件處理。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠中度TBI模型的建立：3只在打擊后迅速死亡。4只在打擊后8小時死亡。隨機用其他大鼠重新造模以補充缺失樣本。最終成功建立TBI模型40只，均為中度損傷。
　　 2、大鼠BMSCs的分離與培養(yǎng)：分離培養(yǎng)的細胞具有BMSCs的生物學(xué)特性，呈梭形、具有貼壁生長性。培養(yǎng)7天后可得到原代BMSCs。
　　 3、立體定向移植：各組大鼠均獲得成功移植，術(shù)后無死亡。
　

5、　 4、病理學(xué)檢查：HE染色示對稱部間質(zhì)致密，神經(jīng)元形態(tài)正常。半暗帶間質(zhì)略疏松，神經(jīng)元水腫、密度較對稱部略低，偶可見皺縮神經(jīng)元。在BMSCs組及聯(lián)合移植組大鼠大腦皮層的顆粒細胞層及半暗帶內(nèi)均可見呈梭形的BMSCs。尼氏染色示半暗帶內(nèi)尼氏體數(shù)量較對稱部聯(lián)合移植組半暗帶的BDNF含量明顯高于對照組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過立體定向移植法聯(lián)合移植BMSCs與VEGF可有效抑制TBI發(fā)生后半暗帶中BDNF