運動和PDGF-AB對缺血心肌纖維化及FoxO3a通路參與調控心臟微血管內皮細胞缺血重灌注損傷的研究.pdf

1、目的:(1)探討心肌梗死早期進行運動訓練聯(lián)合使用 PDGF-AB進行促血管新生治療對缺血心肌纖維化及巨噬細胞分布的影響;
　　(2)探討B(tài)DNF及低氧對年青和年老CMECs粘附單核細胞的功能影響;(3)闡明FoxO3a信號通路對心臟微血管內皮細胞(CEMCs)在缺血/重灌注損傷(IR)的影響,以及構建FoxO3a的突變載體。
　　方法:(1)使用Masson’s Trichrome染色和CD68免疫組化,對使用PDGF-AB

2、治療組、PBS+運動(跑臺運動)處理組、PDGF-AB+運動處理組和PBS組的心梗心臟的纖維化及巨噬細胞分別對比分析;
　　(2)使用BDNF預處理年青與年老CMECs6 h和12 h;另在低氧預處理CMECs6 h后加入外周血單核細胞,并將其在正常氧及低氧條件下培養(yǎng),并于45min,2 h,3 h分別檢測其對單核細胞的粘附作用。
　　(3)使用體外培養(yǎng) CMECs的缺血/再灌注模型,對 FoxO3a通路是否調控細胞周期、細

3、胞凋亡及細胞活性進行研究;利用 pEGFP-N1載體構建FoxO3a的突變體。
　　結果:(I)運動及PDGF-AB促血管新生治療,對缺血心肌纖維化及巨噬細胞研究部分:
　?、貾DGF-AB組及 PDGF-AB+運動組的心臟橫斷面膠原面積顯著小于PBS對照組(p<0.05), PDGF-AB+運動組的心臟橫斷面膠原面積顯著小于 PBS+運動組(p<0.05);
　　②PBS+運動組,PDGF-AB組,PDGF-AB+運

4、動組的心臟梗死區(qū)膠原面積顯著小于 PBS對照組(p<0.05);
　　③PBS+運動組,PDGF-AB組, PDGF-AB+運動組的血管周邊膠原面積分別與 PBS對照組比較沒有明顯差異(p>0.05);
　　④PBS+運動組,PDGF-AB組,PDGF-AB+運動組,心臟梗死區(qū)的M1型巨噬細胞數(shù)分別與 PBS對照組比較,沒有明顯差異(p>0.05)。
　　(II)低氧及BDNF處理CMECs對外周血單核細胞粘附作用部分

5、:
　?、倌昵嗯c年老CMECs在正常氧狀態(tài),其粘附外周血單核細胞數(shù)沒有明顯差異;
　?、谠诘脱?5％)培養(yǎng)6 h,年老CMECs粘附外周血單核細胞數(shù)明顯高于年輕CMECs;
　?、勰昵郈MECs經(jīng)過BDNF處理各組別,其粘附外周血單核細胞數(shù)與對照組比較沒有太大差異;
　　④年老CMECs經(jīng)過BDNF處理各組別,其粘附外周血單核細胞數(shù)與對照組比較沒有太大差異。
　　(III)CEMCs在缺血/重灌注損傷(IR

6、)研究部分:
　?、僭谂c對照組的細胞活性(設定100%活性)相比較,得出在經(jīng)過IR6 h, IR12 h, IR24 h處理后的CMECs活性明顯降低;
　　②當使用Akt的激活劑和抑制劑處理CMECs時發(fā)現(xiàn)了Akt能通過對 FoxO3a的磷酸化作用下調控FoxO3a通路的活性;當 CMECs受到I/R損傷時,FoxO3a被明顯激活,伴隨著Akt活性的降低;
　?、跜MECs在經(jīng)過I/R處理后,通過p27Kip1的上調

7、作用導致了細胞的細胞周期停留在G1期,并且停留在G1期的細胞量顯著增多,同時明顯激活caspase-3的活性;
　?、墚斢肁kt激活劑 IGF-1處理 CMECs時,能抑制 FoxO3a通道的活性,明顯阻礙了由 I/R誘導激活的p27Kip1和caspase-3的活性提高。
　?、菟鶚嫿ǖ膒EGFP-FoxO3a-TSS的突變體重組子基因序列與目的基因完全匹配,并能在293T細胞中表達。
　　結論:(1)運動、PDGF

8、-AB治療及運動+PDGF-AB治療均能顯著減少缺血心臟纖維化,運動+PDGF-AB治療的效果最佳;
　　(2)在低氧狀態(tài)下,年老CMECs粘附外周血單核細胞的能力高于年青CMECs;
　　(3)BDNF對年老CMECs、年青CMECs進行處理并不能提高其粘附外周血單核細胞的能力;
　　(4)FoxO3a通路通過調節(jié)細胞周期和細胞凋亡進而在CMEC缺血/重灌注損傷過程中發(fā)揮重要功能;
　　(5)成功構建了能在29