

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1、目的:構(gòu)建慢病毒/mIL12過表達(dá)重組體,培育出可長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)mIL12的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞株(mIL12-BMSCs),并研究其對(duì)大鼠結(jié)腸癌(CT26)模型的影響。
方法:設(shè)計(jì)并合成引物,PCR擴(kuò)增并回收純化后的 p40和p35基因片段,行Overlap-ping PC R連接獲得mIL12的單鏈雙亞基表達(dá)融合基因,與慢病毒包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,構(gòu)建慢病毒過表達(dá)重組體,再轉(zhuǎn)染BMSCs,藥物篩選培育出穩(wěn)轉(zhuǎn)株;小鼠CT
2、26皮下抑制瘤模型造模成功后,每次A組瘤周注射0.2mlmIL12-BMSCs、B組0.2mlPBS液、C組0.2mlBMSCs、D組0.2ml表達(dá)IL12的慢病毒液(rLV/IL12),統(tǒng)計(jì)并分析各組瘤體生長(zhǎng)情況。
結(jié)果:流式細(xì)胞儀鑒定第3代大鼠BMSCs表型CD29+、CD34-、CD44+、CD45-;基因測(cè)序證實(shí)慢病毒/mIL12過表達(dá)重組體構(gòu)建成功;ELISA法檢測(cè)出穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞可長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)IL12;統(tǒng)計(jì)分析得出,觀
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