知母皂甙B-Ⅱ?qū)^氧化損傷RGC-5程序性壞死的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：研究中藥知母提取物——知母皂甙B-Ⅱ?qū)^氧化氫誘導(dǎo)的RGC-5程序性壞死的作用，并初步探討其可能的機制。
　　方法：將培養(yǎng)的節(jié)細胞系RGC-5分為正常組（A組）、單純過氧化氫處理組（B組）、知母皂甙B-Ⅱ預(yù)處理C、D、E、F組。其中知母皂甙B-Ⅱ的濃度分別為1μmol/L（C組）、10μmol/L（D組）、100μmol/L（E組）、1000μmol/L（F組）。將A、B、C、D、E、F各組放37℃，5％ CO2培養(yǎng)箱中孵育

2、24小時后，A、B組不作處理，C、D、E、F組分別加入相應(yīng)濃度的知母皂甙B-Ⅱ孵育24小時。在此基礎(chǔ)上，除A組外，每組均加入終濃度為300μmol/L H2O2孵育24小時。用倒置顯微鏡觀察各組處理后細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，用流式細胞儀檢測AnnexinⅤ/PI雙染的程序性壞死的細胞，用MTT assay檢測RGC-5增殖活性，用微量丙二醇(MDA)試劑盒檢測RGC-5中MDA含量，用ELISA法檢測細胞腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量。<

3、br>　　結(jié)果：300μmol/L H2O2孵育24小時后，MTT assay結(jié)果顯示細胞的抑制率達到60％，采用流式細胞術(shù)檢測出大量AnnexinⅤ/PI雙染細胞，表明程序性壞死是H2O2誘導(dǎo)的RGC-5丟失的一種方式。預(yù)先用知母皂甙B-Ⅱ孵育24小時能顯著減少H2O2誘導(dǎo)的RGC-5的丟失，其保護作用在1μmol/L至100μmol/L濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。預(yù)先用100μmol/L知母皂甙B-Ⅱ孵育能顯著降低H2O2誘導(dǎo)的RGC-