P2Y受體激發(fā)HIF-1活性并對小鼠成神經細胞瘤細胞和小神經膠質細胞生長的影響機制.pdf

1、目的：研究P2Y嘌呤受體在小膠質細胞和成神經細胞瘤細胞中對缺血誘導因子1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）的作用。
　　方法：
　　1.細胞培養(yǎng)，BV-2小鼠小膠質細胞和Neuro2a小鼠成神經細胞瘤細胞在加有10％牛胎血清的DMEM細胞培養(yǎng)液中，37℃，5%二氧化碳潮濕的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2.應用RT-PCR技術、RNA干擾技術、蛋白印跡技術和熒光素酶報告基因技術檢測HIF-1及其

2、應答基因mRNA轉錄和蛋白表達，并利用不同蛋白激酶特異性抑制劑，觀察HIF-1表達與相關信息傳導通路之間的關系，采用MTT法和3H-TdR摻入法檢測小鼠成神經細胞瘤細胞和小神經膠質細胞中DNA合成和細胞增殖。
　　結果：
　　1．UTP時間依賴性的激活HIF-1蛋白表達，但對HIF-1α mRNA轉錄沒有影響，說明其調控是在轉錄后和/或翻譯水平上進行的。
　　2．UTP時間依賴性的激活HIF-1應答基因VEGF和GLU

3、T1 mRNA轉錄。
　　3．HIF-1表達上調與PLC/PKC/[Ca2+]、PI3K/AKT/mTOR和ERK1/2信息通路的激活有關。
　　4．PI3K/AKT/mTOR、ERK1/2信息通路的激活與EGFR轉錄激活有關，后者激活又涉及c-Src和NADPH氧化酶信息通路。
　　5．HIF-1在UTP誘導的小鼠成神經細胞瘤細胞和小神經膠質細胞中DNA合成與細胞增殖中起重要作用。
　　結論：在小膠質細胞和成神