雷帕霉素通過調(diào)控mTOR信號通路及SIRT水平增加雌性大鼠的卵泡儲備和延長卵巢壽命.pdf

1、研究目的:
　　觀察雷帕霉素(Rapamycin)對成年雌性大鼠各級卵泡發(fā)育及卵巢壽命的影響,并對mTOR信號通路及SIRT在其中的作用進(jìn)行探討。
　　材料與方法:
　　將16只雌性SD大鼠隨機分為:對照組和雷帕霉素干預(yù)組。雷帕霉素溶解在5.2％Tween-80和5.2%聚乙二醇400中。在正常攝食狀態(tài)下,雷帕霉素干預(yù)組每隔1天給予腹腔注射5mg/kg雷帕霉素+5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400,對照組則

2、單純給予腹腔注射5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400。
　　實驗開始后每日行陰道涂片觀察大鼠動情周期變化并記錄食物攝入量,每周監(jiān)測體重變化一次。實驗第5周開始進(jìn)行受孕實驗;實驗第10周,將大鼠麻醉后取卵巢稱量重量,取卵巢組織進(jìn)行蘇木精-伊紅染色觀察各級卵泡并計數(shù),計算卵泡總數(shù)和各級卵泡數(shù)量占卵泡總數(shù)的百分比例。免疫組織化學(xué)染色觀察mTOR和P-P70S6K在卵泡中的表達(dá)和定位;通過蛋白免疫印跡技術(shù)來測量卵巢組織中mTO

3、R、P-P70S6K、SIRT1和SIRT6蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　進(jìn)食量統(tǒng)計結(jié)果:對照組大鼠的進(jìn)食量保持基本穩(wěn)定,平均21.3±1.0g/d/只;雷帕霉素干預(yù)組大鼠的進(jìn)食量平均14.2±0.6g/d/只,大約是對照組的67.1%(P<0.001)。
　　體重統(tǒng)計結(jié)果:對照組大鼠的體重在前4周逐漸增加,在第4周末統(tǒng)計時明顯比雷帕霉素干預(yù)組大鼠重(291.3±5.2g/只vs.269.5±6.2g/只,p<0.05

4、)。雷帕霉素干預(yù)組的體重從第4周到實驗結(jié)束都沒有明顯改變,最終體重為255.5±11.3g/只;而對照組大鼠的體重為343.5±11.4g/只,明顯比雷帕霉素干預(yù)組大鼠重(P<0.001)。
　　卵巢重量統(tǒng)計結(jié)果:對照組大鼠的卵巢重量大約是雷帕霉素干預(yù)組組大鼠的2.5倍,分別為0.106±0.003gvs.0.047±0.014g(P<0.001).
　　動情周期監(jiān)測和受孕實驗結(jié)果:對照組大鼠在整個實驗過程中都表現(xiàn)出規(guī)則的動

5、情周期,而且都能正常受孕。雷帕霉素干預(yù)組大鼠的動情周期從實驗開始第4周就有25%(2/8)出現(xiàn)都不規(guī)則;第8周有87.5%(7/8)出現(xiàn)都不規(guī)則;到實驗結(jié)束時所有干預(yù)組大鼠的動情周期都不規(guī)則,主要表現(xiàn)為動情周期延長,而且都沒有任何大鼠受孕。
　　卵泡計數(shù)結(jié)果:雷帕霉素干預(yù)組大鼠原始卵泡數(shù)(132.5±13.7vs.63.4±6.2)是對照組的2倍多(P<0.001),而竇狀卵泡數(shù)和閉鎖卵泡數(shù)明顯低于對照組,分別為(28.5±3.2

6、vs.55.4±5.7,P<0.01)和(11.9±1.9vs.26.8±3.6,P<0.01)。
　　免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:mTOR和P-P70S6K在卵泡的胞漿表達(dá)明顯,而在顆粒細(xì)胞表達(dá)不明顯。
　　蛋白免疫印跡技術(shù)結(jié)果:雷帕霉素干預(yù)組卵巢組織中mTOR和P-P70S6K蛋白表達(dá)水平明顯低于對照組(P<0.05),SIRT1和SIRT6蛋白表達(dá)明顯增強(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　雷帕霉素能夠通過抑制m