豬P58IPK通過(guò)PERK-eIF2α通路調(diào)控PCV2誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬的研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)感染抑制豬免疫反應(yīng)，并伴隨與其他病原體混合感染，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)。PCV2感染誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，并通過(guò)PERK/eIF2α通路誘導(dǎo)未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)，且細(xì)胞自噬和PERK/eIF2α通路的激活都有利于病毒增殖。近年來(lái)部分研究表明，UPR也參與細(xì)胞自噬的調(diào)控，然而PCV2感染是否通過(guò)PERK/eIF2α通路誘導(dǎo)細(xì)胞自噬還有待研究。此外，分子伴侶蛋白P58IPK可抑制PERK活性，負(fù)反饋調(diào)節(jié)PERK/e

2、IF2α通路，且是PCV2衣殼蛋白(Cap)的潛在互作蛋白。鑒于此，本研究以宿主的UPR為切入點(diǎn)，探討豬分子伴侶蛋白P58IPK對(duì)PCV2誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬的作用與機(jī)理。主要的研究結(jié)果如下:
　　1.PCV2感染通過(guò)PERK/eIF2α通路調(diào)控細(xì)胞自噬
　　利用PERK特異性抑制劑和siRNA分別干擾PERK通路，PCV2感染24h后的ATG5-ATG12(0.32 vs0.25，P＜0.0001)及LC3-Ⅱ（0.23 vs0

3、.07，P＜0.0001）的水平顯著下調(diào)。說(shuō)明PCV2感染通過(guò)PERK/eIF2α通路調(diào)控自噬水平。
　　2.P58IPK通過(guò)PERK/eIF2α通路調(diào)控PCV2感染所誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬
　　分子伴侶蛋白P58IPK可抑制PERK活性，通過(guò)定量PCR檢測(cè)證實(shí)PCV2感染24h時(shí)P58IPK mRNA表達(dá)顯著升高（1.00 vs1.62，P＜0.0001），然而在12、48和72h時(shí)P58IPK mRNA表達(dá)低于對(duì)照。該結(jié)果表明在

4、PCV2感染24h前后P58IPK表達(dá)受到抑制。
　　過(guò)表達(dá)P58IPK顯著下調(diào)PCV2感染24h后所誘導(dǎo)的p-eIF2α(0.051 vs0.037，P＜0.0001),ATG5-ATG12(0.07 vs0.03,P＜0.0001)及LC3-Ⅱ(0.30 vs0.14,P＜0.0001)的表達(dá)。說(shuō)明過(guò)表達(dá)P58IPK可能通過(guò)抑制PERK活性進(jìn)而下調(diào)PCV2感染誘導(dǎo)的自噬。
　　綜上所述，本研究不僅驗(yàn)證了PCV2感染誘導(dǎo)內(nèi)