三氧化二砷聯(lián)合塞萊昔布對HCCLM-,3-肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、第一部分三氧化二砷、塞萊昔布對HCCLM3肝癌細胞的作用 目的：探討三氧化二砷、塞萊昔布對HCCLM<,3>肝癌細胞生長、粘附、運動、侵襲及其復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達的影響。 方法：采用MTT法測定三氧化二砷、塞萊昔布對HCCLM<,3>肝癌細胞生長、粘附能力的影響；利用Transwell小室法了解三氧化二砷、塞萊昔布對HCCLM<,3>肝癌細胞運動、侵襲能力的作用；運用細胞爬片免疫組化方法了解三氧化二砷、塞萊昔布對HCC

2、LM<,3>肝癌細胞MMP-2、VEGF、CD44V6和E-cadherin表達的影響。 結(jié)果：三氧化二砷、塞萊昔布呈濃度和時間依賴性抑制HCCLM<,3>肝癌細胞的生長，在低濃度時兩者即有協(xié)同作用。4.0μmol/l三氧化二砷、80μmol.l塞萊昔布單用及合用48h對HCCLM<,3>肝癌細胞的粘附、運動、侵襲能力均有抑制作用，作用強度：聯(lián)合組>As<,2>O<,3>組>Celecoxib組>對照組。4.0μmol/l三氧化

3、二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細胞MMP-2表達，但主要是As<,2>O<,3>在起作用；4.0μmol/l三氧化二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細胞中VEGF的表達，但以聯(lián)合組作用最強，As<,2>O<,3>、Celecoxib作用相似；4.0μmol/l三氧化二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能上調(diào)HCCLM<,3>肝癌細胞E-c

4、adherin、下調(diào)CD44V6的表達，作用強度：聯(lián)合組>Celecoxib組>As<,2>O<,3>組>對照組。 結(jié)論：三氧化二砷、塞萊昔布能抑制HCCLM<,3>肝癌細胞的生長、粘附、運動和侵襲能力，其作用機制可能是通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達來實現(xiàn)，兩者間有協(xié)同作用。 第二部分三氧化二砷聯(lián)合塞萊昔布對裸鼠HCCLM3肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的影響 目的：探討三氧化二砷、塞萊昔布對裸鼠HCCLM<,3>肝癌切除術(shù)后復(fù)

5、發(fā)、轉(zhuǎn)移及其相關(guān)基因表達的影響。 方法：建立間接原位移植HCCLM<,3>肝癌裸鼠模型和模擬人肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移裸鼠模型。給予三氧化二砷、塞萊昔布藥物治療；觀測裸鼠一般情況；術(shù)后33天處死裸鼠，測量肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌體積、數(shù)量；計數(shù)肺微轉(zhuǎn)移灶；采血檢測肝、腎功能；采用免疫組化方法了解三氧化二砷、塞萊昔布對肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌組織中MMP-2、VEGF、CD44V6和E-cadherin表達的影響；采用實

6、時定量PCR技術(shù)檢測肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌組織中VEGF的表達。 結(jié)果：各實驗組肝臟HCCLM<,3>肝癌復(fù)發(fā)情況：對照組(6/6)，塞萊昔布組(8/8)，三氧化二砷組(5/8)，聯(lián)合組(3/8)。各實驗組復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌體積(mm<'3>)：對照組(1917.00±647.55)，塞萊昔布組(387.69±202.39)，三氧化二砷組(61.63±107.30)，聯(lián)合組(4.69±7.24)。各實驗組HCCL

7、M<,3>肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移情況：對照組(5/6)，塞萊昔布組(2/8)，三氧化二砷組(1/8)，聯(lián)合組(0/8)。各實驗組HCCLM<,3>肝癌肺微轉(zhuǎn)移灶(個)：對照組(5.50±1.05)，塞萊昔布組(1.63±1.60)，三氧化二砷組(0.88±1.25)，聯(lián)合組(0.25±0.71)。各實驗組裸鼠體重、肝、腎功能測定無統(tǒng)計學(xué)意義。三氧化二砷、塞萊昔布能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌組織中MMP-2、VEGF，上調(diào)E-cadherin的表達

8、，且兩者作用相似，聯(lián)合應(yīng)用作用最強；As<,2>O<,3>、Celecoxib能下調(diào)HCCLM<,3>肝癌組織中CD44V6的表達，作用強度：聯(lián)合組>As<,2>O<,3>組>Celecoxib組>對照組。 結(jié)論：三氧化二砷、塞萊昔布能減小肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌體積和數(shù)量，聯(lián)合使用有相加效應(yīng)；三氧化二砷、塞萊昔布能減少HCCLM<,3>肝癌的肺轉(zhuǎn)移，聯(lián)合使用有相加效應(yīng)。三氧化二砷、塞萊昔布對各組裸鼠的體重、肝、腎功能無明

9、顯影響。三氧化二砷、塞萊昔布抑制HCCLM<,3>肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的機制可能是通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達來實現(xiàn)。兩種藥物有協(xié)同作用。 第三部分對三氧化二砷、塞萊昔布協(xié)同機制的探討材料與方法 目的：探討三氧化二砷、塞萊昔布抑制HCCLM<,3>肝癌的協(xié)同機制。 方法：流式細胞儀檢測三氧化二砷、塞萊昔布對HCCLM<,3>肝癌細胞周期和凋亡的影響。細胞爬片免疫組化方法了解三氧化二砷、塞萊昔布對HCCLM<,3>肝癌細胞CO

10、X-2和NF-kBp65表達的影響。免疫組化方法檢測裸鼠肝臟復(fù)發(fā)HCCLM<,3>肝癌組織中COX-2和NF-kBp65的表達。 結(jié)果：4．0μmol/l三氧化二砷、80μmol/l塞萊昔布單用及合用48h均能干擾HCCLM<,3>肝癌細胞周期，將其阻滯于G<,0>/G<,1>期；三氧化二砷、塞萊昔布均能增加HCCLM<,3>肝癌細胞的凋亡，而且聯(lián)合組凋亡率大于單用組之和。體外實驗：4．0μmol/l三氧化二砷上調(diào)HCCLM<,

11、3>肝癌細胞NF-kBp65和COX-2表達，80μmol/l塞萊昔布下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細胞COX-2表達，對NF-kBp65表達無明顯影響，聯(lián)合應(yīng)用塞萊昔布能明顯降低三氧化二砷上調(diào)NF-kBp65引起的COX-2表達增加。體內(nèi)實驗：三氧化二砷下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細胞NF-kBp65和COX-2表達，塞萊昔布下調(diào)HCCLM<,3>肝癌細胞COX-2表達，對NF-kBp65表達無明顯影響，三氧化二砷、塞萊昔布聯(lián)合應(yīng)用顯著下調(diào)