NOX1和NOX4在小鼠腦缺血再灌注損傷中的表達及功能.pdf

1、目的:觀察NOX1和NOX4在大腦缺血再灌注損傷中的表達及功能。
　　方法:將雄性昆明鼠共36只隨機分為假手術組(Sham組),大腦中動脈缺血再灌注模型組(MCAO)和抑制劑組(Betulinic組)三組,每組均有兩個檢測時間點(建模后第1天和第3天),每個時間點6只小鼠。抑制劑組中的樺木脂酸(Betulinic)溶于二甲基亞砜制劑(DMSO)并管飼預處理小鼠7天,Sham組和MCAO用等量的DMSO預處理7天。將Sham組小鼠暴

2、露頸總動脈,而在MCAO組和Betulinic組中行大腦中動脈線栓建立MCAO模型。建模成功后分別于第1天和第3天后將小鼠處死,斷頸取腦,通過TTC染色測定梗死面積;分別采用Real-time PCR及原位雜交方法觀察大腦缺血再灌注過程中NOX1和NOX4時間變化及表達部位。然后,采用CM-H2DCF-DA熒光法測定活性氧簇(ROS)產(chǎn)量。最后,采用TUNEL染色法觀察隨著NOX1和NOX4表達變化神經(jīng)元細胞凋亡率的變化。統(tǒng)計分析時MC

3、AO組以Sham組為參照,Betulinic組以MCAO組為參照。
　　結果:TTC染色顯示Sham組梗死不明顯,第1天和第3天MCAO組的梗死面積分別為13.6i1.23％和8.46i0.82%,Betulinic預處理后梗死面積減低為1.6i0.28%和1.7?0.35%(P<0.05);MCAO組中的NOX1在第1天表達升高3.2i0.24倍(P<0.05),在皮質中出現(xiàn)表達,而第3天降低到正常水平在皮質中表達消失,而在Be

4、tulinic組中,分別下降2.5i0.18倍(P<0.05)及1.7i0.13倍(P<0.05);MCAO組中NOX4分別升高2.1i0.21倍及3.7i0.34倍(P值均<0.05),與Sham組相比表達部位沒有明顯的改變,Betulinic組NOX4分別降低2.7i0.26倍及2.3i0.22倍(P值均<0.05);ROS產(chǎn)量在第1天和第3天分別為492.1i15.27%及478.9i14.23%,明顯高于對照組的22.3i1.3

5、5及21.4i2.46(P值均<0.05),在Betulinic組中,ROS產(chǎn)量均明顯減少(78.6i4.31%和92.3i8.34%,P值均<0.05)。同樣Sham組凋亡不明顯,MCAO組第1天和第3天凋亡率分別為74.3i6.58%及47.9i4.35%(P值均<0.05),而Betulinic兩組組凋亡率均降低為21.2i2.16%及5.7i0.49%(P值均<0.05)。
　　結論:NOX1和NOX4在缺血再灌注中表達呈