多肽P-15改性后的豬松質骨支架材料與人羊膜間充質干細胞相容性的實驗研究.pdf

1、目的：研究經(jīng)P-15多肽改性后的豬松質骨支架材料是否更適合人羊膜間充質干細胞的粘附、增殖以及分化。
　　方法：(1)綜合目前去抗原方法對豬松質骨支架材料進行脫脂、脫蛋白處理。(2)傳代培養(yǎng)人羊膜間充質干細胞至第5代。(3)將骨支架材料分為兩組，每組36塊，實驗組用P-15溶液浸泡24小時，室溫干燥，對照組用PBS溶液浸泡24小時，室溫干燥。每塊骨支架材料上滴加濃度為1×106/ml的人羊膜間充質干細胞的細胞懸液250μl。分別在第

2、6、12、24、48小時采用胰蛋白酶消化細胞計數(shù)，計算兩組的細胞粘附率；在第3、5、7、9天同樣采用胰蛋白酶消化細胞計數(shù)法測得兩組的細胞增殖情況，繪制增殖曲線；在3、7、14、21天將支架上細胞消化、裂解，測其成骨堿性磷酸酶的活性。
　　結果：(1)經(jīng)過脫脂、脫蛋白處理的骨支架材料外觀呈白色，輕度發(fā)灰，似海綿狀的多孔隙材料，孔壁光滑，總體硬度無明顯變化，但脆性增加。(2)原代 hAMSCs呈梭形、多角形或星形，貼壁生長，傳代培養(yǎng)后

3、，細胞表現(xiàn)為成纖維細胞樣克隆，呈細長的梭形，排列緊密，多呈放射狀或漩渦狀貼壁生長。(3) hAMSCs在實驗組與對照組支架上細胞粘附率有明顯不同，第6小時實驗組粘附率（20.0±2.6，％）>對照組（19.3±1.5，%），但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；實驗組第12小時（40.7±1.5，%）、24小時（45.3±2.5，%）、48小時（52.7±1.2，%）粘附率均>對照組12小時（24.3±4.1，%）、24小時（31.0±1

4、.7，%）、48小時（37.3±4.7，%）粘附率，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；實驗組第3天（20.7±2.5，×104）、第5天（30.3±2.3，×104）、第7天（42.3±3.5，×104）、第9天（41.3±6.5，×104）增殖細胞數(shù)均>對照組第3天（14.7±0.6，×104）、第5天（20.7±4.0，×104）、第7天（29.7±1.1，×104）、第9天（33.0±5.6，×104）增殖細胞數(shù)，差異具有統(tǒng)計學

5、差異（P<0.05），比較結果實驗組細胞增殖情況明顯優(yōu)于對照組；實驗組第3天（0.362±0.052）、第7天（0.551±0.011）、第14天（0.785±0.034）、第21天（0.812±0.125） ALP OD值均>對照組第3天（0.171±0.027）、第7天（0.383±0.055）、第14天（0.445±0.043）、第21天（0.580±0.662）ALP OD值，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論