胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞對自身向成骨細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：探討由胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells,ESCs)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞(Ec)與自體胚胎干細(xì)胞共培養(yǎng)時對ESCs成骨作用的影響
　　 方法：雌雄小鼠合籠后，取13.5天的小鼠胚胎，制備成為原代胚胎成纖維細(xì)胞(PMEF)，加入專用培養(yǎng)液，運(yùn)用絲裂霉素C處理制成培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞的飼養(yǎng)層。再取受精后4～5天的小鼠，從子宮中取出囊胚進(jìn)行培養(yǎng)，將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)集落進(jìn)行離散，將細(xì)胞在飼養(yǎng)層中進(jìn)行體外培養(yǎng)傳代，并且采用類胚體培養(yǎng)和

2、核型分析進(jìn)行ESC鑒定。再取ESC加入堿性成纖維細(xì)胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子，將其誘導(dǎo)生成EC，并通過vWF免疫熒光檢測對EC進(jìn)行檢測。培養(yǎng)細(xì)胞分為四組：A組胚胎干細(xì)胞組B組胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)組C組胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)生成的內(nèi)皮細(xì)胞(Ec)誘導(dǎo)組D組(ESCs和誘導(dǎo)的EC聯(lián)合培養(yǎng)組)，通過干細(xì)胞形態(tài)的觀察、免疫熒光、細(xì)胞的增值、堿性磷酸酶的測定從酶學(xué)等不同方面觀測誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞，細(xì)胞對胚胎干細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化的影響。
　　 結(jié)果：M

3、EF在接種30min后開始貼壁，90min后絕大多數(shù)細(xì)胞均已貼壁生長，細(xì)胞呈不規(guī)則的三角，48h后細(xì)胞逐漸變?yōu)殚L梭狀或纖維狀。ES細(xì)胞直徑12-15um，集落樣生長，呈圓形，集落邊緣光滑清晰呈扁平狀。通過細(xì)胞免疫熒光染色證實C組培養(yǎng)誘導(dǎo)的細(xì)胞為EC。D組ESCs和誘導(dǎo)的Ec聯(lián)合培養(yǎng)組MTT檢測結(jié)果各組細(xì)胞生長差異沒有顯著意義(P＞0.05)骨鈣素和堿性磷酸酶測定D組有明顯差異高于其他三組(P＜0.05)
　　 結(jié)論：以胚胎干細(xì)胞