Multl和Multls轉(zhuǎn)基因小鼠的表型分析和亞健康狀態(tài)的生物標(biāo)志物的研究.pdf

1、NK細(xì)胞活化型受體2D(Naturalkillergroup2memberD，NKG2D)表達(dá)于多種免疫細(xì)胞的表面，在免疫應(yīng)答中起著非常重要的作用。鼠類UL16結(jié)合蛋白樣轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1(MurineULBPliketranscript1，MULT1)及其剪切變體MULT1S是小鼠NKG2D配體。MULT1是胞內(nèi)段較長(zhǎng)的跨膜蛋白，與NKG2D呈高親和力結(jié)合。它在成年小鼠的細(xì)胞表面不表達(dá)或低表達(dá)，在病理?xiàng)l件下，如應(yīng)激細(xì)胞、細(xì)菌或病毒感染細(xì)胞表面

2、有表達(dá)或表達(dá)上調(diào)。有文獻(xiàn)報(bào)道，MULT1可以通過(guò)與NKG2D結(jié)合，促使表達(dá)NKG2D的NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞等免疫細(xì)胞活化，促進(jìn)它們對(duì)腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的裂解，從而實(shí)現(xiàn)抗感染和抗腫瘤功能。但是，MULT1和MULT1S在體內(nèi)過(guò)表達(dá)會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生什么影響？MULT1和MULT1S是否還具有其它功能，兩者在功能上有何區(qū)別等問(wèn)題也有待解決。為此，我們實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了Mult1和Mult1s轉(zhuǎn)基因小鼠。本文第一部分工作是分析Mult1轉(zhuǎn)基因小鼠表型

3、變化以及轉(zhuǎn)基因?qū)Ω腥久庖吆湍[瘤免疫的影響。
　　 在這一部分，我們選取了6周齡—l2月齡的Mult1轉(zhuǎn)基因小鼠，對(duì)胸腺、脾臟和小腸進(jìn)行表型分析。結(jié)果顯示，Mult1轉(zhuǎn)基因小鼠的胸腺明顯小于同窩對(duì)照鼠，NKG2D+的NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、NKG2D+的y8T細(xì)胞略有升高；脾細(xì)胞表型分析結(jié)果顯示，NKG2D+的NK細(xì)胞、B細(xì)胞、NKT細(xì)胞和NKG2D+的γδT細(xì)胞的比例略有下降；轉(zhuǎn)基因小鼠的小腸上皮間γδT細(xì)胞表面的NKG2D表達(dá)水

4、平降低。這提示我們轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)腸道疾病的抵抗能力可能減弱。為了驗(yàn)證這一假說(shuō)，我們選擇由硫酸葡聚糖鈉(Dextransulfatesodiumsalt，DSS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型。與對(duì)照組相比，急性炎癥期的轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)DSS反應(yīng)更加敏感，體重迅速減輕，病程進(jìn)展快；進(jìn)入慢性期后，轉(zhuǎn)基因小鼠的病程與對(duì)照組小鼠相近，但炎癥結(jié)腸組織白細(xì)胞介素-1α(lnterleukin-1α，IL-1α)、IL-12/23(p40)和干擾素-γ(Interfer

5、on-γ，IFN-γ)的分泌水平顯著下調(diào)。
　　 通過(guò)對(duì)Mult1-RMA腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組小鼠相比，轉(zhuǎn)基因組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)速度加快，生存率顯著降低。提示體內(nèi)過(guò)表達(dá)MULT1降低機(jī)體對(duì)腫瘤的抵御能力。
　　 與MULT1類似，UL-16結(jié)合蛋白(UL-16bindingproteins,ULBPs)及MHC-Ⅰ-類鏈(MHC-classIchain，MIC)分子是人的NKG2D配體，這些配體在正常細(xì)胞上不表達(dá)或

6、呈低水平表達(dá)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，在一些應(yīng)激狀態(tài)，如DNA損傷和氧化應(yīng)激情況下，部分ULBPs的表達(dá)有顯著升高。亞健康是受到環(huán)境、心理、生理等方面刺激后發(fā)生的相應(yīng)代償反應(yīng)，即應(yīng)激反應(yīng)。但國(guó)內(nèi)關(guān)于亞健康的研究多偏重社會(huì)心理、環(huán)境和生活方式等因素的影響，醫(yī)學(xué)方面的數(shù)據(jù)較少。如果能針對(duì)ULBPs和MICA/B分子的表達(dá)水平和機(jī)體亞健康狀態(tài)之間的關(guān)系展開(kāi)研究，找到亞健康與這些應(yīng)激分子表達(dá)量的關(guān)系，可望對(duì)難于評(píng)價(jià)的亞健康狀態(tài)提供一個(gè)客觀的指標(biāo)和數(shù)據(jù)。所以

7、，本文第二部分的研究旨在探究ULBPs及MIC分子在亞健康狀態(tài)診斷及評(píng)價(jià)中的作用。
　　 在這一部分，我們采用了WHO公認(rèn)的較為全面的心理功能衰退指數(shù)(mentalityfunctiondeclineindex，MDI)健康評(píng)估法和體檢相結(jié)合的方法對(duì)招募的志愿者進(jìn)行分類，然后檢測(cè)血清中ULBPs和MICA/B分子的含量，并分析其與受檢者健康狀態(tài)的關(guān)系。結(jié)果顯示，亞健康組的血清MICB含量明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.01)。目前對(duì)

8、亞健康的診斷缺乏比較客觀的生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，所以，MICB的表達(dá)水平的變化將有望成為一個(gè)新的臨床參考指標(biāo)，有助于提高對(duì)亞健康狀態(tài)評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性。此外，研究結(jié)果顯示男性組的MICA和ULBP3的表達(dá)顯著高于女性組(P＜0.05)。而且隨著年齡的增長(zhǎng)，ULBP2和ULBP4也會(huì)出現(xiàn)顯著性差異。提示，未來(lái)在用ULBPs或MICA/B等應(yīng)激分子作為臨床診斷指標(biāo)時(shí)，其參考值的設(shè)立需要考慮年齡、性別等帶來(lái)的差異。
　　 本研究主要得到以下結(jié)論：