依達(dá)拉奉在脂多糖所致小鼠ARDS肺纖維化中的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　建立脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）肺纖維化的小鼠動物模型，探討抗氧化劑依達(dá)拉奉（EDA）對小鼠ARDS肺纖維化的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　72只雄性ICR小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham組）、脂多糖致傷組（LPS組）和LPS+EDA治療組（簡稱EDA組）；各組再分為1d組、3d組、7d組和14d組，每組6只。LPS組由氣道內(nèi)滴入LPS（5mg/kg，2.5mg/ml）；Sh

2、am組氣道內(nèi)滴入與LPS等量的生理鹽水；EDA組，氣道內(nèi)滴入LPS前1h和后12h，分別予以腹腔注射EDA（5mg/kg）。于各觀察終點（1d、3d、7d和14d）處死實驗小鼠，留取肺組織待檢。檢測肺組織濕/干重比（W/D），光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變，檢測肺組織腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、丙二醛（MDA）、髓過氧化酶（MPO）、Ⅰ型膠原（ColⅠ）和羥脯氨酸（HYP）水平，免疫組化法檢測肺組織內(nèi)高遷移率

3、族蛋白B1（HMGB1）的轉(zhuǎn)位，Western Blot檢測肺組織HMGB1和α-平滑肌收縮蛋白（α-SMA）的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　?。?）與同時間點Sham組相比，LPS-1d、3d組和EDA-1d、3d組小鼠肺組織的W/D比值增加顯著（p<0.05）；EDA-1d、3d組小鼠肺組織的W/D比值顯著低于同時間點的LPS組（p<0.05）。提示EDA可以顯著改善LPS所致ARDS小鼠的肺水腫程度。
　?。?）光鏡

4、下觀察：與同時間點Sham組比較，LPS組小鼠肺組織毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，肺泡間隔明顯增寬，見大量炎性細(xì)胞浸潤和大量紅細(xì)胞漏出，肺泡腔和間質(zhì)水腫明顯，嚴(yán)重者可見部分肺泡腔萎陷不張、肺泡斷裂。與LPS組同時間點比較，EDA組正常肺泡結(jié)構(gòu)破壞較少，肺組織炎性細(xì)胞浸潤及紅細(xì)胞的漏出較輕，肺泡腔滲出和肺間質(zhì)腫脹程度明顯減輕。LPS-3d組小鼠肺組織除了見大量中性粒細(xì)胞浸潤和肺泡間隔增寬外，還可見纖維母細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞增生。EDA-3d組與LPS-

5、3d組比較，小鼠肺組織纖維母細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞增生不明顯。提示LPS氣道內(nèi)滴注可以誘發(fā)小鼠產(chǎn)生ARDS的肺部病理學(xué)改變，EDA可以顯著減輕ARDS小鼠肺組織的炎癥反應(yīng)，減少肺泡結(jié)構(gòu)的破壞，可能還部分減弱肺組織的纖維化改變。
　　（3）LPS組和EDA組小鼠在接受LPS氣道內(nèi)滴注后1d，肺組織TNF-α和IL-1β含量明顯升高，隨后逐漸降低。與同時間點Sham組比較，LPS組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β含量增加明顯（p<0.05

6、）。EDA組小鼠肺組織TNF-α和IL-1β含量明顯少于與同時間點的LPS組（p<0.05）。
　　（4）LPS-1d組小鼠肺組織MDA含量和MPO活性顯著上升，之后逐漸降低。與同時間點Sham組比較，LPS組MDA含量明顯增加(p<0.01)。EDA-1d組小鼠肺組織中MDA含量與LPS-1d組相比無顯著差異（p>0.05），EDA-3d、7d、14d組小鼠肺組織中MDA含量明顯低于同時間點的LPS組（p<0.05）。LPS-1

7、d、3d、7d組小鼠肺組織中MPO活性明顯高于同時間點Sham組（p<0.05），EDA-1d、3d、7d組小鼠肺組織中的MPO活性顯著低于與同時間點的LPS組（p<0.05）。14d時，Sham組、LPS組和EDA組小鼠肺組織中的MPO活性無顯著差異。提示LPS氣道滴注早期就可以導(dǎo)致激活小鼠肺組織的炎癥反應(yīng)和增加氧自由基的釋放；EDA可以通過抑制炎癥反應(yīng)、清除氧自由基，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)，具有抗氧化的作用。
　?。?）免疫組化結(jié)果

8、提示，LPS誘導(dǎo)后，小鼠肺組織HMGB1的表達(dá)主要定位在胞漿，與同時間點Sham組相比，LPS組小鼠肺組織單核巨噬細(xì)胞浸潤明顯較多，HMGB1陽性免疫反應(yīng)產(chǎn)物較多；EDA組小鼠肺組織單核巨噬細(xì)胞浸潤和HMGB1表達(dá)強(qiáng)度與同時間點LPS組比較有所減少。Western Blot結(jié)果顯示，LPS組和EDA組小鼠肺組織HMGB1相對表達(dá)量逐漸升高，3d時達(dá)到最高值，隨后逐步減少。與同時間點Sham組相比，LPS組和EDA組小鼠肺組織HMGB1相

9、對表達(dá)量均有顯著增加（p<0.05)。EDA組小鼠肺組織HMGB1相對表達(dá)量明顯低于與同時間點LPS組（p<0.05)。提示LPS氣道內(nèi)滴注可以導(dǎo)致小鼠肺組織HMGB1表達(dá)增加，EDA可以抑制HMGB1的表達(dá)。
　?。?）LPS組和EDA組小鼠肺組織α-SMA相對表達(dá)量和ColⅠ、HYP含量逐漸升高，3d時達(dá)到最高值，隨后逐步減少。與同時間點Sham組相比，LPS組小鼠肺組織α-SMA相對表達(dá)量和ColⅠ、HYP含量顯著增加（p<

10、0.05)。EDA-1d、3d、7d組小鼠肺組織α-SMA相對表達(dá)量顯著低于同時間點LPS組（p<0.05）。而EDA組小鼠肺組織的ColⅠ、HYP含量顯著低于與同時間點LPS組（p<0.05)。提示LPS氣道滴注可以導(dǎo)致小鼠肺組織早期的纖維增生表現(xiàn)，EDA可以減輕LPS所致小鼠ARDS肺纖維化改變。
　　結(jié)論：
　　本實驗通過建立氣道內(nèi)滴注LPS所致ARDS肺纖維化的小鼠動物模型，研究了抗氧化劑EDA對LPS所致小鼠ARD