膠質(zhì)瘤放射敏感性與ATM蛋白表達(dá)關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分:不同放射敏感性膠質(zhì)瘤中ATM蛋白、NF-κB及EGFR的表達(dá)及其相關(guān)性研究 目的:探討ATM蛋白、NF-κB和EGFR在不同放射敏感性膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平和相互關(guān)系及其與膠質(zhì)瘤放射敏感性的相關(guān)關(guān)系。 方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測了ATM蛋白、NF-κB及EGFR在11例髓母細(xì)胞瘤，12例室管膜瘤，17例少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤，低級(jí)別(Ⅰ～Ⅱ級(jí))及高級(jí)別星形細(xì)胞瘤(Ⅲ～Ⅳ級(jí)，其中11例多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)各21例和

2、5例正常腦組織中的表達(dá)。 結(jié)果:正常腦組織中均未見陽性表達(dá)；不同組織類型的膠質(zhì)瘤中三者均具有不同的陽性表達(dá)率和平均光密度值，ATM蛋白、NF-κB和EGFR的陽性表達(dá)率依次為32.9％，48.8％和51.2％；三者同時(shí)陽性和陰性表達(dá)者分別為25.6％、36.5％；ATM蛋白在多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤表達(dá)率最高，在髓母細(xì)胞瘤和低級(jí)別星形細(xì)胞瘤表達(dá)較低，髓母細(xì)胞瘤中平均光密度值與其他各組均有顯著性差異(p＜0.05)，在低及高級(jí)別星形細(xì)胞

3、瘤間平均光密度值有顯著性差異(p＜0.05)。NF-κB和EGFR表達(dá)率在髓母細(xì)胞瘤、室管膜瘤、少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤、低及高級(jí)別星形細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中呈依次上升趨勢。 結(jié)論:ATM蛋白與NF-κB及EGFR存在相關(guān)關(guān)系，它們的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的不同放射敏感性具有相關(guān)性。 第二部分:ATM蛋白表達(dá)及細(xì)胞增殖活性與星形細(xì)胞瘤放射敏感性關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究 目的:探討星形細(xì)胞瘤中ATM蛋白表達(dá)及細(xì)胞增殖活性與放射敏感性的

4、相關(guān)性，為臨床治療提供參考。 方法:采用流式細(xì)胞儀檢測了22例星形細(xì)胞瘤中ATM蛋白的表達(dá)，并用四唑鹽比色法(MTT)檢測原代培養(yǎng)星形細(xì)胞瘤以60Co2Gy放射劑量照射后的存活分?jǐn)?shù)(SF2)，以探討ATM蛋白的表達(dá)量與星形細(xì)胞瘤放射敏感性的相關(guān)性；同時(shí)觀察了5例原代培養(yǎng)的多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化并繪制生長曲線，采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，以明確星形細(xì)胞瘤增殖活性與放射敏感性的相關(guān)關(guān)系。

5、 結(jié)果:原代培養(yǎng)的星形細(xì)胞瘤細(xì)胞形態(tài)多樣；SF2平均值為0.417±0.176(0.162～0.735)，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤與星形細(xì)胞瘤Ⅱ、Ⅲ級(jí)間存在明顯差異(p＜0.05)；ATM蛋白表達(dá)水平隨星形細(xì)胞瘤惡性程度的增高而增加，在高、低級(jí)別星形細(xì)胞瘤間差異有顯著性(p＜0.05)；直線相關(guān)與回歸分析顯示：ATM蛋白表達(dá)水平與SF2呈顯著正相關(guān)(r=0.857，p＜0.05)；5例原代培養(yǎng)的多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長曲線和增殖活性各不相

6、同，PCNA標(biāo)記指數(shù)與SF2的相關(guān)系數(shù)r為0.628(p＞0.05)。 結(jié)論:ATM蛋白的表達(dá)水平與星形細(xì)胞瘤放射敏感性密切相關(guān)，放射敏感性與PCNA指數(shù)之間無明顯相關(guān)性；星形細(xì)胞瘤中存在不同放射敏感性的細(xì)胞群，放射治療應(yīng)體現(xiàn)個(gè)體化原則。 第三部分:多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤放射前后ATM蛋白的表達(dá)及ATM/PI3-K區(qū)基因突變的檢測 目的:探討多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞輻射前后ATM蛋白表達(dá)量的變化及ATM

7、/PI3-K區(qū)基因突變的情況。 方法:采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測U251細(xì)胞系及5例原代培養(yǎng)的多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞以2Gy射線劑量照射前后ATM蛋白表達(dá)量的變化，以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)和PCR產(chǎn)物直接測序方法，對(duì)多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中ATM/PI3-K區(qū)關(guān)鍵區(qū)域進(jìn)行突變檢測。 結(jié)果:U251細(xì)胞系中60Co照射前后ATM蛋白量均明顯低于原代培養(yǎng)GBM的ATM蛋白量，U251和原代GBM細(xì)胞ATM蛋