α-干擾素聯(lián)合化療誘導(dǎo)黑色素瘤血管正常化中的初步研究.pdf

1、目的：本研究擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討IFN-α聯(lián)合治療的可能機(jī)制,以及周細(xì)胞及其新標(biāo)志物RGS5在聯(lián)合治療中可能所起的作用。
　　 方法：將黑色素瘤細(xì)胞株B16細(xì)胞種植在小鼠左前下肢靠背側(cè)皮下,7天后隨機(jī)分成三組：空白對照組，DTIC單藥處理組和DTIC+IFN-α聯(lián)合處理組，每組7只。第16天處死小鼠，測量腫瘤長短徑以計(jì)算腫瘤體積；數(shù)字放射照相術(shù)分析血管形態(tài)；免疫組化檢測CD31計(jì)算微血管密度(MVD)，檢測α-SMA分析微血管成熟

2、周細(xì)胞覆蓋度和檢測腫瘤HIF-α陽性細(xì)胞的表達(dá)個(gè)數(shù)以分析缺氧區(qū)域；實(shí)時(shí)定量PCR分析RGS5 mRNA的表達(dá)；Western Blot檢測RGS5和HIF-α的表達(dá)；以及免疫熒光分析RGS5在黑色素瘤中的表達(dá)部位。
　　 結(jié)果：DTIC聯(lián)合IFN-α處理組相對于單用DTIC化療組和對照組，腫瘤生長明顯受到抑制,腫瘤體積顯著下降(對照組5.806±1.436 cm3 vs.DTIC組2.946±1.266 cm3 vs.聯(lián)合治療組

3、1.658±0.949 cm3；P<0.05)。IFN-α聯(lián)合處理組還顯示腫瘤血管正?；?，膨大的血管顯著減少，平均血管直徑下降(對照組1.0000±0.5142 mm vs.DTIC組0.8375±0.4676 mm vs.聯(lián)合化療組0.3835±0.2122mm；P<0.05)；微血管密度(MVD)下降(聯(lián)合化療組21±9 vessels/mm2)vs.對照組62±16 vessels/mm2 vs.DTIC組41±11 vessel

4、s/mm2；P<0.05)；微血管成熟周細(xì)胞覆蓋度顯著上升(DTIC+IFN-α聯(lián)合處理組69.7±16.8％ vs.DTIC處理組32±13％ vs.對照49±12％；P<0.05)；腫瘤缺氧顯著緩解(對照組145±13 HIF-α+cells/field vs.DTIC組119±22 HIF-α+cells/field vs.IFN-α聯(lián)合化療組66±32 HIF-α+cells/field；P<0.05)。除此之外，我們還發(fā)現(xiàn)黑色

5、素瘤高表達(dá)RGS5蛋白，但是不是表達(dá)在黑色素瘤細(xì)胞，而是表達(dá)在腫瘤管腔周圍。IFN-α聯(lián)合處理組相對于DTIC化療組和對照組，RGS5表達(dá)顯著下降(RGS5 mRNA對照組2.996±0.197 vs.DTIC處理組2.312±0.697 vs.聯(lián)合治療組 1.102±0.208，P<0.05)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)提示黑色素瘤高表達(dá)RGS5蛋白，但是不是表達(dá)在黑色素瘤細(xì)胞，而是表達(dá)在腫瘤管腔周圍——周細(xì)胞。DTIC聯(lián)合IFN-