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文檔簡介
1、目的:DAPK3是本研究組于2011年利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選出來的LOH12CR1可能的直接互作蛋白。LOH12CR1可能是一抑癌基因,但其具體生物學(xué)功能及作用機制尚不清楚。驗證LOH12CR1和DAPK3在細胞內(nèi)是否真正存在互作關(guān)系,為LOH12CR1功能的研究提供切入點。
方法:
1.構(gòu)建pCDNA3.1-myc-his-LOH12CR1、pCMV-tag2-DAPK3重組載體,并對HEK293細胞共轉(zhuǎn)染
2、LOH12CR1和DAPK3重組載體,利用免疫共沉淀技術(shù)驗證兩者在細胞內(nèi)的的相互作用;
2.將LOH12CR1和DAPK3共轉(zhuǎn)染于HEK293細胞,通過激光共聚焦技術(shù)觀察兩者在HEK293內(nèi)的免疫熒光亞細胞水平共定位情況。
結(jié)果:
1.免疫共沉淀實驗顯示LOH12CR1與DAPK3在HEK293細胞內(nèi)存在相互作用;
2.免疫熒光亞細胞共定位實驗初步提示LOH12CR1和DAPK3存
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