多不飽和脂肪酸及聯(lián)合表阿霉素對胃癌的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和目的：胃癌居全球惡性腫瘤的發(fā)病率第二位，在我國高居首位，胃癌死亡率居全球第5位。雖然我國在胃癌綜合治療方面做了大量研究，并取得一定效果，但胃癌術(shù)后5年總生存率仍不足40％。因此，研究新的綜合治療方法顯得尤為重要。文獻(xiàn)報道多不飽和脂肪酸(polylJnsaturated fatty acid，PUFA)對多種惡性腫瘤均具有抑制作用，但對胃癌作用的報道較少。 本研究擬通過體外實(shí)驗(yàn)觀察花生四烯酸(arachidonic ac

2、id，AA)、二十碳五烯酸(eicosapelltaenoic acid，EPA)、二十二碳六烯酸(ducosahexenoic acid，DHA)三種多不飽和脂肪酸單用及聯(lián)合化療藥物表阿霉素(epirubicin，EPI)對胃癌細(xì)胞作用；通過動物實(shí)驗(yàn)觀察ω-3脂肪乳劑單用及聯(lián)合表阿霉素對胃癌移植瘤和荷瘤裸鼠的作用。以評估多不飽和脂肪酸對胃癌細(xì)胞和腫瘤的作用，對EPI細(xì)胞毒作用的影響，以及對荷瘤動物的的影響，并初步探討其作用機(jī)制。以期為

3、胃癌的綜合治療探索新的途徑。 研究方法：以胃癌細(xì)胞株MGC-803和裸鼠體內(nèi)動物模型為研究對象，進(jìn)行體外和在體兩個水平的研究。采用1、以人胚肺成纖維細(xì)胞(HPF)為正常對照細(xì)胞，MTT法檢測多不飽和脂肪酸單用和聯(lián)合EPI對腫瘤細(xì)胞抑制作用的時效及量效關(guān)系，2、MTT法檢測多不飽和脂肪酸和EPI序貫用藥對腫瘤細(xì)胞抑制作用的時效及量效關(guān)系，應(yīng)用等效線圖解法判斷脂肪酸和EPI合用相互作用關(guān)系；3、觀察ω-3多不飽和脂肪酸單用和聯(lián)合表阿

4、霉素對荷瘤鼠的一般情況和腫瘤生長情況；4、相差顯微鏡觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)的變化，光鏡觀察細(xì)胞脂肪染色后脂肪的代謝情況，透射電鏡觀測藥物作用后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變；4、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測藥物對細(xì)胞周期分布的影響，Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)觀察藥物作用后細(xì)胞調(diào)亡情況；5、Western blot法檢測藥物對腫瘤細(xì)胞和組織的腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、在體外，EPA、DHA在15-90μg/ml濃度范

5、圍內(nèi)，AA在60-90μg/ml濃度圍內(nèi)，對胃癌細(xì)胞株均具有明顯的抑制作用，且呈濃度和時間依賴性(P<0.01)； 2、在體外，在15-90μg/ml濃度范圍內(nèi)，EPA、AA對人胚肺成纖維細(xì)胞株均具有明顯的促進(jìn)增殖作用(P<0.01)；DHA雖然有抑制作用，但比對胃癌細(xì)胞的抑制作用小2-4倍； 3、在體外，三種脂肪酸能夠明顯增強(qiáng)表阿霉素對腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并呈濃度依賴性(P<0.01)。EPA和DHA與EPI對腫瘤細(xì)胞

6、的作用是協(xié)同的(P<0.05)。而AA的協(xié)同作用不明顯(P>0.05)； 4、在體外，流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)多不飽和脂肪酸可將細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，與表阿霉素合用可增加細(xì)胞的晚期凋亡或?qū)е录?xì)胞死亡。 5、在體內(nèi)，單純ω-3脂肪乳劑對裸鼠腫瘤生長的抑制作用不明顯(P>0.05)，但可以減少胃癌腫瘤的的侵襲性和局部轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤組織局灶性壞死。與表阿霉素聯(lián)合時，抑制作用明顯大于表阿霉素單用者(P<0.05)； 6、

7、在體內(nèi)，單純ω-3脂肪乳劑對裸鼠體重影響不明顯(P>0.05)，但與表阿霉素聯(lián)合應(yīng)用時，裸鼠體重明顯大于表阿霉素單用者(P<0.05)；與表阿霉素單用相比，聯(lián)合應(yīng)用可以維持裸鼠的一般狀態(tài)，減少表阿霉素對腸管、腸粘膜的損傷。 7、無論體內(nèi)或體外，多不飽和脂肪酸可引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，包括胞漿、核周致密顆粒，胞漿脂肪堆積次級溶酶體堆積，細(xì)胞凋亡或死亡；還可降低細(xì)胞和腫瘤組織的核轉(zhuǎn)錄因子K B(NF-K B)和與凋亡相關(guān)的基因BCL-2

8、的表達(dá)。 研究結(jié)論：1、多不飽和脂肪酸(PUFA)無刺激胃癌細(xì)胞增殖的作用，在體外合適濃度時，能抑制胃癌腫瘤細(xì)胞而不影響正常細(xì)胞，但達(dá)不到化療藥那樣的殺傷效力；2、ω-3多不飽和脂肪酸脂肪乳劑單獨(dú)應(yīng)用，雖然對胃癌移植瘤的增長無明顯抑制作用，但可能減少胃癌腫瘤的的侵襲性和局部轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致腫瘤組織局灶性壞死，并可引起腫瘤細(xì)胞代謝障礙，凋亡或死亡；3、多不飽和脂肪酸脂肪乳劑可以增強(qiáng)EPI抗腫瘤效果，說明與EPI單獨(dú)作用相比，聯(lián)合多不飽和