MLK3結(jié)合蛋白對(duì)腦缺血JNK通路調(diào)控的研究.pdf

1、在大鼠和沙土鼠動(dòng)物全腦缺血模型中,短暫的全腦缺血導(dǎo)致海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的選擇性死亡,這種遲發(fā)的神經(jīng)元細(xì)胞丟失只有在缺血/復(fù)灌2—4天后才能觀察到。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明,這種遲發(fā)的神經(jīng)元死亡的分子機(jī)制中存在凋亡過(guò)程。JNK蛋白激酶信號(hào)的激活是介導(dǎo)腦缺血應(yīng)激引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡的重要通路;最近,一種胞內(nèi)絲/蘇氨酸蛋白激酶MLK3被發(fā)現(xiàn),MLK3作為JNK級(jí)聯(lián)上游的重要活化因子,通過(guò)直接磷酸化并激活中游MKK4/7蛋白激酶,從而激活JNK應(yīng)激信號(hào)通路

2、。MLK3介導(dǎo)了JNK誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡和腦缺血損傷通路,并因此受到重視。然而,關(guān)于腦缺血/復(fù)灌激活MLK3的信號(hào)調(diào)控分子機(jī)制尚不清楚。
　　本文主要探討了MLK3的兩種直接結(jié)合蛋白POSH和Rac1對(duì)MLK3/JNK信號(hào)通路以及對(duì)腦缺血損傷的調(diào)控作用。POSH通過(guò)組裝POSH-MLK3/MKK4/JNKs信號(hào)模塊介導(dǎo)JNK通路的激活和腦缺血/復(fù)灌誘導(dǎo)的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷。我們首先用免疫印跡和免疫組化的方法觀察了海馬CA1區(qū)PO

3、SH蛋白在SD大鼠腦缺血/復(fù)灌后的表達(dá)分布情況。
　　結(jié)果顯示,假手術(shù)組和缺血/復(fù)灌組POSH蛋白的胞漿免疫活性在海馬CA1和CA3錐體細(xì)胞較強(qiáng),然而在DG顆粒細(xì)胞表達(dá)較弱。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明,POSH能與MLK3、MKK4以及p-JNKs免疫共結(jié)合,在復(fù)灌30分鐘時(shí)達(dá)最高值,在復(fù)灌1-3天時(shí)仍高于對(duì)照組。
　　同時(shí),在腦缺血/復(fù)灌30分鐘和3天時(shí)MLK3/MKK4/JNKs信號(hào)通路存在兩個(gè)活化峰。腦室注射POSH反義寡核苷

4、酸不僅能顯著降低其蛋白表達(dá)、抑制POSH與MLK3,MKK4,和p-JNKs級(jí)聯(lián)組分的結(jié)合,還能夠抑制MLK3/MKK4/JNKs信號(hào)通路的激活。而且,腦室注射POSH反義寡核苷酸顯著增加了腦缺血/復(fù)灌5天后海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元的數(shù)量。
　　結(jié)果提示,POSH可能作為支架蛋白介導(dǎo)了腦缺血/復(fù)灌后海馬CA1區(qū)JNK信號(hào)通路的激活,POSH反義寡核菅酸通過(guò)抑制MLK3/MKK4/JNKs通路,并涉及c-Jun和Caspase-3的抑