絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙的病理生理基礎(chǔ)及通絡(luò)方藥干預(yù)研究.pdf

1、目的：本研究以絡(luò)病理論為指導(dǎo)，以血管內(nèi)皮功能障礙為切入點，建立病證結(jié)合絡(luò)氣虛滯中醫(yī)證候動物模型與細胞模型，從整體與細胞水平探討絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙的病理生理基礎(chǔ)，并研究不同類別通絡(luò)方藥的干預(yù)作用。 血管內(nèi)皮功能障礙(endothelial dysfunetion，ED)系血管內(nèi)皮細胞在多種病理因素(如高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙、壓力等)刺激下失去正常功能的病理過程，與氧化應(yīng)激、免疫損傷及炎癥機制關(guān)系密切，主要表現(xiàn)為內(nèi)皮依

2、賴性舒張功能障礙及血管活性物質(zhì)分泌紊亂，是心腦血管病發(fā)生的始動因素和重要環(huán)節(jié)。 中醫(yī)學(xué)認為血液在血管中正常運行需要氣的推運，氣虛運血無力或氣滯血運不暢均可導(dǎo)致血液運行障礙及血管病變?；诮j(luò)病理論研究的“三維立體網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)”，廣義絡(luò)脈分為氣絡(luò)和脈絡(luò)，脈絡(luò)運行血液，其解剖形態(tài)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)血管系統(tǒng)具有同一性，由此而提出“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”(vessel-collateral and vascular system disorders，VC

3、VSD)概念；氣絡(luò)運行經(jīng)氣，發(fā)揮溫煦充養(yǎng)、防御衛(wèi)護、信息傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)控制作用。絡(luò)氣虛滯(stagnancy of collateral-qi in a deficiency condition，SCQDC)是脈絡(luò)病變由功能性病變向器質(zhì)性病變發(fā)展的早期階段，其引起的脈絡(luò)自適應(yīng)、自調(diào)節(jié)、自穩(wěn)態(tài)功能失常，為“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”(vessel-collateral and vasctllarsystem disorders，VCVSD)始動因素并

4、貫穿和影響病變的全過程，與血管內(nèi)皮功能障礙具有內(nèi)在一致性，也涵蓋了西醫(yī)學(xué)更廣泛的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)功能異常對血管病變的影響。這啟發(fā)我們將中醫(yī)氣血相關(guān)的絡(luò)病理論特色與現(xiàn)代微觀研究有機結(jié)合，探討“絡(luò)氣虛滯”狀態(tài)下NEI 網(wǎng)絡(luò)調(diào)控失常變化規(guī)律及其與血管內(nèi)皮功能障礙之間的內(nèi)在聯(lián)系，并探索不同類別通絡(luò)方藥的干預(yù)機制。 方法：本研究采用同型半胱氨酸制作血管內(nèi)皮功能障礙的基礎(chǔ)模型，在此基礎(chǔ)上應(yīng)用“基礎(chǔ)進食+強迫負重游泳”誘發(fā)氣虛證候的

5、方法，建立絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合的動物模型。以通過臨床流行病學(xué)調(diào)查建立的“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”證候診斷標(biāo)準(zhǔn)為基準(zhǔn)，分別從中醫(yī)證候?qū)W、血管內(nèi)皮功能變化及血管舒縮反應(yīng)性改變等方面對所建模型進行評價，并應(yīng)用單味益氣中藥、益氣活血組分配伍方藥、通絡(luò)復(fù)方從不同層次進行通絡(luò)反證。以此為實驗平臺，探討絡(luò)氣虛滯狀態(tài)下NEI 網(wǎng)絡(luò)的變化規(guī)律及其與血管內(nèi)皮功能障礙之間的內(nèi)在相關(guān)性，以及通絡(luò)方藥改善血管內(nèi)皮功能的作用機制。同時培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株

6、ECV-304，通過加入絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮功能障礙模型大鼠血清，建立體外絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮細胞損傷模型，并應(yīng)用上述不同通絡(luò)方藥進行干預(yù)，在細胞水平上進一步探討絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮細胞的損傷機制及通絡(luò)方藥的影響。 本實驗建立了絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮功能障礙病證結(jié)合動物模型，應(yīng)用生物信息學(xué)方法探討了絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙與 NEI 網(wǎng)絡(luò)相關(guān)的病理生理學(xué)基礎(chǔ)及可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制，并探討了不同類別通絡(luò)方藥干預(yù)機制，為運用通絡(luò)方藥防治心腦血管病提供實驗依

7、據(jù)。 1．本研究以近年來社會心理因素對人體造成的超負荷壓力在各種急性心腦血管病發(fā)生中的影響為立題背景，以絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙臨床證候診斷標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，首先采用高蛋氨酸飲食誘發(fā)高同型半胱氨酸血癥建立血管內(nèi)皮功能障礙模型，以“基礎(chǔ)進食+強迫負重游泳”法誘發(fā)氣虛證候，并以人參、雙參、通心絡(luò)超微粉三種通絡(luò)藥物進行干預(yù)，建立絡(luò)氣虛滯病證結(jié)合動物模型，觀察并記錄實驗動物的證候?qū)W表現(xiàn)、檢測血管內(nèi)皮功能及血管內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)的變化。實驗結(jié)

8、果顯示，所建動物模型表現(xiàn)出了明顯的絡(luò)氣虛滯證候特征，同時血管內(nèi)皮功能及內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)顯著下降，三個層次的通絡(luò)干預(yù)可使上述病、證得到不同程度的改善，而且與“脈絡(luò)—血管系統(tǒng)病”絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙的臨床證候診斷標(biāo)準(zhǔn)基本吻合，表明模型成功。 2．實驗結(jié)果提示，HCY組血管內(nèi)皮功能受損，AngⅡ明顯升高，但絡(luò)氣虛滯型內(nèi)皮功能障礙與HCY組比較，AngⅡ升高更為明顯，差異顯著，顯示絡(luò)氣虛滯是AngⅡ上升的重要因素。同時看到，腎素

9、、醛固酮下降，RAAS系統(tǒng)并未激活，而NE與AngⅡ呈現(xiàn)出同步升高的密切關(guān)系，提示交感神經(jīng)興奮可能是AngⅡ升高的主要原因，這反映“過勞傷氣”所致植物神經(jīng)功能失調(diào)可能在血管病變中起著重要作用。而 NEI 網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)功能出現(xiàn)了嚴重紊亂，主要表現(xiàn)為下丘腦機能偏亢，受其調(diào)節(jié)的垂體功能反而低下，同時該功能軸靶腺腎上腺皮質(zhì)功能也表現(xiàn)出低下，提示NEI網(wǎng)絡(luò)的穩(wěn)態(tài)失衡可能與絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)系。 3．生物信息學(xué)的研究結(jié)

10、果表明，絡(luò)氣虛滯組 NEI 網(wǎng)絡(luò)指標(biāo)和內(nèi)皮功能障礙指標(biāo)之間可以形成相互獨立的子系統(tǒng)(如：ET與CRH、ACTH、GC及ALD；AngⅡ與ET、IL-1；PGI2與ALD；NO與ALD分別是4個相互獨立的系統(tǒng))，這些子系統(tǒng)是按照復(fù)雜系統(tǒng)最優(yōu)化原則發(fā)生相互聯(lián)系，而正常對照組、HCY組、通絡(luò)干預(yù)組不存在這種子系統(tǒng)之間的相互聯(lián)系，提示過勞傷氣是導(dǎo)致 NEI 網(wǎng)絡(luò)紊亂的主要因素，絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙可能與 NEI 網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)態(tài)失衡存在著密切相關(guān)

11、性，后者可能是該狀態(tài)下血管內(nèi)皮功能障礙發(fā)生、發(fā)展的病理生理學(xué)基礎(chǔ)之一。2005 年本課題啟動時經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)信息研究所查詢MEDLINE(1966.1～2005.6)、PubMed(2005．1～2005．6)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫(1978．1～2005．4)、中文生物醫(yī)學(xué)期刊文獻數(shù)據(jù)庫(2005．1～2005．6)文獻，僅有神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫分系統(tǒng)與血管病變相互關(guān)系的文獻報道，未見 NEI 網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)功能失常對血管病變影響的報

12、道。盡管本研究僅部分揭示 NEI 網(wǎng)絡(luò)功能失調(diào)對血管內(nèi)皮功能障礙的影響，但由于 NEI 網(wǎng)絡(luò)作為多維立體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在保持人體穩(wěn)態(tài)機制中的重要作用，深入探討其對血管病變影響及其內(nèi)在規(guī)律需要引起重視。 4．整體動物模型研究發(fā)現(xiàn)，絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙 COHb 含量顯著下降，HO-1mRNA和蛋白表達下調(diào)，同時JNK和c-Jun mRNA及JNK和磷酸化c-Jun蛋白水平均顯著降低，提示絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障礙HO-1/CO 系

13、統(tǒng)被抑制。以絡(luò)氣虛滯血管內(nèi)皮功能障礙動物模型血清干預(yù)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，建立細胞損傷模型，進一步從細胞水平上證實了絡(luò)氣虛滯動物模型所引起的HO-1/CO系統(tǒng)被抑制與JNK/c-Jun信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)。 5．整體及細胞水平的研究結(jié)果顯示，通絡(luò)方藥可明顯升高NO，降低ET，改善血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)，同時可降低CRH、AngⅡ及IL-6 等水平，升高血漿腎素、醛固酮及糖皮質(zhì)激素等水平，基于生物信息學(xué)分析結(jié)果，絡(luò)氣虛滯型血管內(nèi)皮功能障