沙利度胺在肝癌細胞MHCC97-H荷瘤裸鼠中的作用機制的實驗學研究.pdf

1、沙利度胺因具有抗血管生成作用而可能對某些腫瘤有治療作用。本研究旨在通過觀察沙利度胺對裸鼠原位MHCC97-H種植瘤生長的影響，探討沙利度胺的抗腫瘤作用機制和與化療藥物的聯(lián)合應用。 第一部分實驗動物模型的構建目的：通過建立動物模型實驗為進一步研究沙利度胺對肝癌的作用機制提供實驗的平臺。方法：先將肝癌腫瘤細胞株MHCC97-H復蘇后培養(yǎng)至所需要的細胞數(shù)2×107mL，將腫瘤細胞接種至裸小鼠的右前肢腋下皮下成瘤，待瘤塊長至直徑約1cm

2、左右時，在無菌條件下將瘤塊切成1mm3的小塊，原位移植至裸小鼠的肝臟左葉肝包膜下。通過稱量原位移植裸小鼠接種后每周體重的變化來觀察其生活習性；最后觀察原位瘤體的形成來研判成瘤的效果。結果：成功率：皮下移植瘤成功為100％(5/5)；原位移植瘤模型成功為100％(25/25)。所有的實驗裸小鼠術后均能存活至實驗結束，存活率100％。結論：該實驗動物模型的構建方法設計新穎，具有良好的成瘤率，對原腫瘤細胞的生物學特性具有一貫性，為肝癌的實驗研

3、究提供的一個很好的實驗平臺。 第二部分藥物對荷瘤裸小鼠的作用及相關指標的測定目的：通過對原位荷瘤裸小鼠進行藥物干預，研究沙利度胺對人肝細胞癌(HCC)血管生成和腫瘤生長侵襲的作用，探討沙利度胺對HCC的作用機制，以及與5-FU在HCC中的聯(lián)合應用。方法：將25只原位荷瘤裸小鼠分成5組，分別為A組沙利度胺1組(成瘤術后第1天給藥)、B組沙利度胺2組(成瘤術后第5天給藥)、C組5-FU組、D組聯(lián)合組(沙利度胺+5-FU)和E組對照組

4、(蒸餾水)。沙利度胺采用灌胃方式按200mg/Kg/d給藥，連續(xù)35d；5-FU采用腹腔注射按20mg/Kg/d給藥，連續(xù)5d，后自由飲用蒸餾水。術后第35d脫頸椎法處死小鼠，取出腫瘤標本和肺臟標本，測量瘤體的大小，計算其體積、重量，分別用免疫組化法(SP法)檢測VEGF和微血管密度(MVD)，用RT-PCR法檢測VEGF和MMP-2在腫瘤組織中表達的變化。所有數(shù)據經過SPSSl3.0統(tǒng)計學軟件分析。結果：D組瘤體大小和重量明顯小于E組

5、，和A組、B組、C組比較也具有統(tǒng)計學意義；A組、B組和D組瘤塊中的．VEGF表達和MVD計數(shù)值以及肺臟轉移灶和E組比較差異有顯著的統(tǒng)計學意義，和C組比較也有統(tǒng)計學意義；五組腫瘤組織中MMP-2的表達差異沒有統(tǒng)計學意義。結論：沙利度胺作為一種抗血管生成劑，能抑制腫瘤的生長和降低肺轉移。對荷瘤裸小鼠原位肝癌的作用機制可能主要是通過抑制腫瘤組織中VEGF的表達和MVD的形成來實現(xiàn)的，對MMP-2表達作用不確定；而且沙利度胺聯(lián)合細胞毒性藥物5-