丹參脂溶性成分的色質(zhì)聯(lián)用分析及其作用機(jī)理研究.pdf

1、丹參，又稱血參、紫丹參、紅丹參等，為唇形科鼠尾草屬植物丹參(Salviamiltiorrhiza Bunge)的干燥根及根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，歷代本草均有收載。丹參歸心、肝經(jīng)，藥性微寒，味苦、無(wú)毒，具有祛瘀止痛、活血調(diào)經(jīng)、養(yǎng)心除煩的功效。丹參在臨床上廣泛用于治療心血管系統(tǒng)疾病，具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量、防止心肌缺血和心肌梗塞、改善微循環(huán)、降低心肌耗氧量等作用。其有效成分有水溶性和脂溶性兩大類，水溶性部分主要為酚

2、酸類化合物(包括丹參素、原兒茶醛、丹酚酸等)；脂溶性部分主要為二萜醌類化合物(包括丹參酮ⅡA、隱丹參酮等)。 長(zhǎng)期以來人們對(duì)丹參的研究多集中在其臨床藥效以及配伍應(yīng)用上，對(duì)于分析化學(xué)工作者而言，感興趣的則是丹參的藥效成分，各成分的性質(zhì)以及功效，分析化學(xué)家發(fā)展了多種分析技術(shù)對(duì)丹參藥效成分進(jìn)行提取、分離、純化、表征等工作；對(duì)多種丹參類藥物中所含成分進(jìn)行了測(cè)定；發(fā)展了多種指紋圖譜技術(shù)用于丹參藥材生長(zhǎng)及丹參類藥物生產(chǎn)質(zhì)量的評(píng)估和控制；并進(jìn)

3、行了丹參主要成分的活性及代謝研究。這些理論積累均為丹參的應(yīng)用與發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的發(fā)展，中藥現(xiàn)代化研究也進(jìn)入了一個(gè)新的領(lǐng)域，由過去的“粗獷性”轉(zhuǎn)變?yōu)椤凹?xì)致性”，由過去的“整體”轉(zhuǎn)變?yōu)椤熬唧w”，即以具體成分作為研究對(duì)象，在分子水平上研究其在生命過程中的作用機(jī)理，而不是僅從經(jīng)驗(yàn)上對(duì)中藥藥理藥效進(jìn)行大體上的解釋與推理?；诖?，本研究論文發(fā)展了色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析方法，從分子水平上進(jìn)行丹參脂溶性成分的代謝規(guī)律研究，并探討了丹參脂溶性

4、成分與西藥及功能蛋白分子相互作用的機(jī)理，主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下： 1．建立了用于丹參復(fù)雜體系中多種丹參酮類化合物的同時(shí)分離表征的高效液相色譜(HPLC)與電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜(ESI/TOFMS)聯(lián)用技術(shù)；探討了含有二萜醌結(jié)構(gòu)的丹參酮類化合物在電噴霧質(zhì)譜中的裂解規(guī)律。研究結(jié)果表明：該方法不僅可用于丹參酮類化合物的表征，而且非常適合于其他中藥復(fù)雜體系中多種成分的分離分析，尤其由于TOFMS具有高分辨分子量測(cè)定的能力，可基于精確測(cè)得的

5、化合物分子量，直接對(duì)其結(jié)構(gòu)式進(jìn)行推斷，同時(shí)還可有效地辨別元素組成不同卻具有相似分子量的化合物，在缺乏標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的情況下，可準(zhǔn)確、有效地對(duì)中藥成分進(jìn)行表征。同時(shí)發(fā)揮HPLC的分離能力，一次測(cè)定就可對(duì)19種丹參酮類化合物進(jìn)行分離表征，獲得19種丹參酮的質(zhì)譜裂解過程信息，結(jié)合相關(guān)資料，對(duì)這些化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。本工作所建立的聯(lián)用技術(shù)在中藥及天然產(chǎn)物多成分同時(shí)分析測(cè)定及表征中顯示出其獨(dú)特的優(yōu)越性，為天然藥物的研究提供了重要手段。 2．建

6、立了用于丹參酮代謝研究的高效液相色譜(HPLC)與電噴霧離子阱質(zhì)譜(ESI/ITMS)聯(lián)用技術(shù)；采用質(zhì)譜的全掃描分析功能對(duì)代謝物進(jìn)行分析測(cè)定；總結(jié)了丹參酮代謝物的二級(jí)質(zhì)譜裂解特點(diǎn)，說明丹參酮在一相代謝中主要生成羥基化和去氫化代謝產(chǎn)物，而羥基化代謝物又接著在二相代謝中形成葡醛酸化代謝產(chǎn)物，代謝產(chǎn)物主要通過尿液排出體外。本研究首次對(duì)幾種丹參酮的混合代謝進(jìn)行了研究，表明丹參成分之間在代謝過程中可互相轉(zhuǎn)化，影響各自的代謝行為。該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了

7、中藥整體藥效作用是由藥效成分之間相互作用而產(chǎn)生的說法。 3．采用高效液相色譜(HPLC)與電噴霧離子阱質(zhì)譜(ESI/ITMS)聯(lián)用技術(shù)，考察了丹參主要活性成分丹參酮ⅡA對(duì)西藥華法林(WAR)代謝過程的影響，嘗試對(duì)中西藥相互作用機(jī)理進(jìn)行解釋。研究結(jié)果表明：丹參ⅡA可從兩個(gè)方面影響華法林的代謝，一方面會(huì)與華法林競(jìng)爭(zhēng)酶代謝，使得華法林代謝速率減慢；另一方面又會(huì)與華法林競(jìng)爭(zhēng)與血清蛋白的結(jié)合，使血液中游離態(tài)華法林濃度升高，從而加快華法林的

8、代謝速率。在體內(nèi)代謝實(shí)驗(yàn)中，觀察到后者是影響華法林代謝的決定因素，因?yàn)樵诘⑼駻與華法林混合給藥情況下，經(jīng)歷相同的代謝時(shí)間后，在大鼠尿液及血液中檢測(cè)到大量的華法林代謝物，而在華法林單獨(dú)給藥的大鼠尿液和血液中則只能檢測(cè)到極少量代謝物的存在。實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較清楚地反映了丹參酮ⅡA與華法林相互作用的過程，并可由此對(duì)臨床上丹參與華法林相互作用的機(jī)理進(jìn)行解釋。 4．發(fā)展了電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜(ESI/TOFMS)技術(shù)用于蛋白-配體非共價(jià)復(fù)合物

9、的檢測(cè)，并利用該方法研究了丹參主要成分的水溶性衍生物(丹參酮ⅡA磺酸鈉，STS)與人血清白蛋白(HSA)的非共價(jià)相互作用以及STS對(duì)HSA與華法林(WAR)結(jié)合形成的復(fù)合物的影響。研究結(jié)果表明：丹參成分STS具有與HSA較高的結(jié)合能力，能與HSA以不同化學(xué)計(jì)量比形成非共價(jià)復(fù)合物；WAR也能與HSA高度結(jié)合，但在加入STS后，能觀察到HSA-WAR復(fù)合物含量明顯下降，而HSA-TS含量明顯升高，說明STS將WAR從其與HSA的結(jié)合位點(diǎn)上置