重組腺病毒介導人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因治療膠質(zhì)瘤的實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　本研究旨在探討腺病毒載體(AdV)介導的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因?qū)δz質(zhì)瘤細胞的凋亡效應(yīng)和免疫原性影響，以及動物在體實驗中對膠質(zhì)瘤的治療效果，為進一步膠質(zhì)瘤的聯(lián)合基因治療提供實驗依據(jù)。
　　研究方法：
　　確定適宜的AdV感染倍數(shù)（MOI），選用膠質(zhì)瘤細胞系U251和U87為模型細胞，以攜帶人WT-p53、GM-CSF、B7-1的AdV（BB-102）轉(zhuǎn)染U251和U87細胞后，以Wes

2、tern印跡雜交法檢測WT-p53基因的表達，ELISA法檢測GM-CSF基因的表達，流式細胞儀檢測B7-1基因的表達。臺盼藍染色法觀察細胞存活，繪制生長曲線。PI-Hoechst33342染色法檢測凋亡效應(yīng)。MLR反應(yīng)觀察其對膠質(zhì)瘤細胞免疫原性的影響。并觀察BB-102介導的目的基因體外修飾膠質(zhì)瘤細胞激活細胞毒性T淋巴細胞（CTL）反應(yīng)。在體實驗通過利用非肥胖糖尿病/嚴重聯(lián)合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠重建人免疫系統(tǒng)和皮下移植人膠

3、質(zhì)瘤的模型，然后接種經(jīng)BB-102基因修飾的膠質(zhì)瘤瘤苗，激發(fā)淋巴細胞產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而對瘤苗的免疫保護作用進行評價。
　　結(jié)果：
　　AdV能夠有效轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞，轉(zhuǎn)染效率與MOI在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)，適宜的MOI為200pfu/cell。重組腺病毒BB-102能夠有效地將其所攜帶的三種目的基因?qū)肽z質(zhì)瘤細胞并使其在細胞中高效表達，同時能抑制細胞增殖，誘導膠質(zhì)瘤細胞凋亡，增強其免疫原性并可以激活淋巴細胞的CTL反應(yīng)。應(yīng)