攜帶人野生型p53、B7-1和GM-CSF三基因的Hep-2細(xì)胞瘤苗誘導(dǎo)CIK細(xì)胞特異性抗腫瘤作用.pdf

1、實(shí)驗(yàn)背景和目的：體內(nèi)回輸免疫活性細(xì)胞的過(guò)繼免疫療法，是繼手術(shù)，化療和放療后的第四大腫瘤治療手段。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-inducedkiller，CIK)是由多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞，是一類(lèi)能夠高效非特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞的免疫活性細(xì)胞，這種殺傷作用是非MHC限制性的，且具有易于體外培養(yǎng)增殖、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為具有良好的臨床應(yīng)用前景。但是，目前臨床研究使用的CIK細(xì)胞擴(kuò)增數(shù)量不夠穩(wěn)定，且殺傷活性不夠理想。因此，

2、如何進(jìn)一步提高CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)和殺傷活性，對(duì)于提高臨床療效具有重要意義。以串聯(lián)方式攜帶人野生型p53、B7-1和GM-CSF三基因的重組腺病毒載體(p53-GM-CSF-B7-1-AdV)，命名為BB-102，轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞Hep-2，能從多個(gè)環(huán)節(jié)控制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，其中P53是多年來(lái)倍受人們關(guān)注的一種抑癌基因，GM-CSF在抗原提呈細(xì)胞(APC)的成熟中發(fā)揮重要作用，B7-1與T細(xì)胞表面的CD28結(jié)合能誘導(dǎo)IL-2等淋巴因子的分泌

3、，并防止特異性腫瘤抗原的免疫耐受，是決定第一信號(hào)能否產(chǎn)生T細(xì)胞功能性激活的關(guān)鍵因素。我們認(rèn)為以該腫瘤疫苗與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)有可能誘導(dǎo)出特異性抗腫瘤免疫。本研究旨在通過(guò)BB-102轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞所制備的瘤苗誘導(dǎo)CIK細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng)，以提高CIK細(xì)胞殺傷活性，以期提高CIK細(xì)胞的臨床療效，為腫瘤過(guò)繼免疫治療提供一種新型臨床治療方案。 實(shí)驗(yàn)方法：以BB-102轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞，在高水平表達(dá)B7-1的Hep-2細(xì)胞中加入絲裂

4、霉素C(MMC)使其處于抑制增殖狀態(tài)，制成瘤苗后與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，以活細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)，用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表型改變，用CytoTox96(R)非放射性細(xì)胞毒性分析試劑盒檢測(cè)CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：應(yīng)用Hep-2細(xì)胞瘤苗與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)，培養(yǎng)21天后，轉(zhuǎn)染BB-102的瘤苗-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞和同源CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)分別為5246倍和2216倍，差異有非常顯著意義(P＜0.01)。未轉(zhuǎn)染BB-1

5、02的瘤苗-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞的增殖倍數(shù)為2299倍與同源CIK細(xì)胞的2216倍相比差異無(wú)顯著意義(P＞0.05)。轉(zhuǎn)染BB-102的瘤苗-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞，CD3+CD56+陽(yáng)性細(xì)胞和CD3+CD8+陽(yáng)性細(xì)胞的百分含量顯著高于同源CIK細(xì)胞(P＜0.01)，而未轉(zhuǎn)染BB-102的瘤苗-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞與同源CIK細(xì)胞表型改變無(wú)顯著差異(P＞0.05)。細(xì)胞毒殺傷實(shí)驗(yàn)中，效靶比為40：1條件下，觀察不同培養(yǎng)時(shí)間的CIK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞、

6、Hep-2細(xì)胞的殺傷功能，其中以Hep-2細(xì)胞為靶細(xì)胞時(shí)，轉(zhuǎn)染BB-102的瘤苗-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞裂解活性明顯高于同源CIK細(xì)胞(P＜0.01)，未轉(zhuǎn)染BB-102的瘤苗-CIK共培養(yǎng)細(xì)胞組與同源CIK細(xì)胞組結(jié)果相似(P＞0.05)，以K562細(xì)胞為靶細(xì)胞時(shí)，三組CIK細(xì)胞的毒性作用無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論：BB-102轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞后所制備的瘤苗可促進(jìn)同源CIK細(xì)胞的增殖；不同程度的提高同源CIK