As-,4-S-,4-誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文AsS誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究姓名：葉啟東申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：兒科血液腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：顧龍君20050401Ass誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究中文詳細(xì)摘要目的中藥治療腫瘤已有兩千年歷史，某些抗腫瘤作用并不遜于西藥化療。但中藥組份復(fù)雜，如何有效利用其中抗腫瘤組份，并提供科學(xué)研究數(shù)掘是充分發(fā)展祖國(guó)中醫(yī)藥學(xué)的一個(gè)重要方面，而中藥組份的抗腫瘤研究要實(shí)現(xiàn)現(xiàn)代化，走向國(guó)際化，除了要進(jìn)行大規(guī)模的隨機(jī)多中心臨床研究

2、以外，還要有深入的基礎(chǔ)研究作為后盾進(jìn)行配合。隨著對(duì)As203和維甲酸等研究的深入，并成功應(yīng)用于白血病的治療，近年，中藥組份治療白血病的基礎(chǔ)研究已成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，雄黃的有效組份As4S4在治療濃度下即能有效誘導(dǎo)性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)細(xì)胞株NB4細(xì)胞的凋亡；在臨床上，陸道培教授用As4S4治療APL亦已取得令人滿意的療效。本研究選取部分腫瘤細(xì)胞株體外培養(yǎng)，通過(guò)As4S。處理來(lái)明確其用于治療其它腫瘤的可能性，并進(jìn)一步探索其抗

3、腫瘤細(xì)胞作用的可能機(jī)制，材料和方法本研究以不同濃度的As。s作用于ALK的ALCL腫瘤細(xì)胞系(Karpas299)，人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系(K562)和人急性粒細(xì)胞白m病M2細(xì)胞系(HL一60)不同時(shí)間。應(yīng)用瑞氏染色分析細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，MTS方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖的影響，臺(tái)盼蘭染色觀察腫瘤細(xì)胞活力的影nm利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡的變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)BCRABL和NPMALK融合基因以及凋亡途徑中bcl—XhBa

4、x和Bad基因的表達(dá)變化，WesternBlot分析BCR—ABL和NPM—ALK融合蛋白和信號(hào)途徑pAkt蛋白表達(dá)的變化，從中了解Ass對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用及機(jī)制。結(jié)果As。s。對(duì)腫瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制臺(tái)盼蘭和MTS實(shí)驗(yàn)顯示，在05umol／L濃度下孵育24d時(shí)，AsS。能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。As—S。對(duì)K562、Karpas299和HL一60細(xì)胞的活力均有明顯抑制作用。As—s。對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用星現(xiàn)時(shí)問(wèn)和劑量依賴(lài)性關(guān)系。當(dāng)As。S