外源性鋅離子阻斷感光細(xì)胞與雙極細(xì)胞間的視覺信號(hào)傳導(dǎo)并下調(diào)視網(wǎng)膜TRPM1的表達(dá).pdf

1、目的:在視網(wǎng)膜中，瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白M亞家族，亞基1（Transient receptor potential melastatin1，TRPM1），位于ON-雙極細(xì)胞上，參與ON-雙極細(xì)胞的去極化過(guò)程。在脊椎動(dòng)物的離體視網(wǎng)膜研究中發(fā)現(xiàn)，鋅離子是TRPM1的阻斷劑，但其對(duì)活體哺乳動(dòng)物視網(wǎng)膜功能的影響尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在探討鋅離子是否影響哺乳動(dòng)物視覺信號(hào)的傳遞及TRPM1的表達(dá)。
　　方法:將C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組

2、、實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組小鼠右眼玻璃體內(nèi)注射0.4μl0.01mol/L硫酸鋅溶液，對(duì)照組小鼠右眼以等體積的磷酸鹽緩沖液（Phosphate-buffered saline，PBS）代替，左眼均未做注射。為探討鋅離子的作用時(shí)間，分別于注射后1小時(shí)、1天、1周、4周、8周后行暗適應(yīng)和明適應(yīng)視網(wǎng)膜電圖(Electroretinogram，ERG)檢查。用Western blotting檢測(cè)注射后1天的小鼠視網(wǎng)膜中TRPM1的表達(dá)水平。用免疫熒光法分

3、別標(biāo)記注射后1天和8周的小鼠視網(wǎng)膜PKCα和CtBP2，以觀察視網(wǎng)膜光感受器和突觸的結(jié)構(gòu)及形態(tài)變化。此外，將50μl0.05 mol/L硫酸鋅溶液注射入恒河猴一眼玻璃體內(nèi)，并于注射后2小時(shí)行暗適應(yīng)、明適應(yīng)ERG及ON-OFF反應(yīng)檢查。
　　結(jié)果:在注射硫酸鋅溶液后1天-8周，觀察到小鼠有類似的負(fù)波形ERG:暗適應(yīng)和明適應(yīng)的ERG-b波振幅明顯降低，而a波相對(duì)正常。恒河猴玻璃體腔注射硫酸鋅后也得到了類似結(jié)果。在ON-OFF反應(yīng)中，E

4、RG-b波振幅明顯降低，a波則無(wú)明顯改變。實(shí)驗(yàn)組小鼠視網(wǎng)膜中的TRPM1表達(dá)量下降。免疫熒光顯示:注射后1天的實(shí)驗(yàn)組小鼠1天視網(wǎng)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變。8周后，內(nèi)層視網(wǎng)膜變薄，內(nèi)核層尤為明顯，視桿ON-雙極細(xì)胞數(shù)量減少，異位的視桿雙極細(xì)胞樹突向外核層延伸，同時(shí)光感受器突觸帶數(shù)量明顯減少，外核層可見異位的突觸帶。
　　結(jié)論:鋅離子能阻斷視網(wǎng)膜感光細(xì)胞和視桿和視錐系統(tǒng)ON-雙極細(xì)胞間的視覺信號(hào)傳遞，對(duì)感光細(xì)胞的功能影響不明顯。鋅離子能下