普洱茶水提取物對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝病模型的早期干預(yù)研究.pdf

1、目的:
　　建立大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型，研究普洱茶水提取物(PTE)對(duì)大鼠NAFLD模型的早期干預(yù)并探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　　大鼠NAFLD模型的建立:4-5周齡雄性SD大鼠16只隨機(jī)分為兩組每組8只:普通飼料組和高脂飼料組。分別喂食普通飼料（總熱量:3.5kcal/g）和高脂飼料（總熱量:4.2kcal/g）。實(shí)驗(yàn)4周后處死所有大鼠，同時(shí)檢測(cè)大鼠體重，肝濕重及肝指數(shù);血清總膽固醇(TC)、甘

2、油三酯(TG)、高密度脂蛋自膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋自膽固醇(LDL-C)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，堿性磷酸酶(ALP);并觀察肝臟病理學(xué)變化。
　　干預(yù)試驗(yàn):4-5周齡雄性SD大鼠32只隨機(jī)分為四組每組8只:正常對(duì)照組，高脂模型組，普洱茶組，飲食干預(yù)組。正常對(duì)照組喂食普通飼料12周;高脂模型組喂食高脂飼料12周;普洱茶組喂食高脂飼料4周建立NAFLD模型后，繼續(xù)喂食高脂飼料并同時(shí)加用PTE1.58g/

3、(kg.d)灌胃8周，每次灌胃體積為1ml/100g體重;飲食干預(yù)組喂食高脂飼料4周建立NAFLD模型后，改為喂食普通飼料持續(xù)8周。除普洱茶組以外，其余各組同時(shí)灌胃等體積的生理鹽水。大鼠體重每周稱量記錄一次，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行12周后處死全部大鼠。檢測(cè)大鼠體重，肝濕重及肝指數(shù);血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及ALT、AST、ALP;肝臟TC、TG含量;并觀察肝臟病理學(xué)變化;通過(guò)實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timePCR)方法檢測(cè)各組大鼠肝

4、臟固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(Sterolregulatoryelementbindingprotein-1c，SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(Fattyacidsynthase，F(xiàn)AS)、乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl-coenzymeAcarboxylase，ACC)，過(guò)氧化物酶體增生物激活受體γ(Peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ，PPAR-γ)，過(guò)氧化物酶體增生物激活受體α(P

5、eroxisomeproliferator-activatedreceptor-α，PPAR-α)，激素敏感脂肪酶(Hormone-sensitivelipase，HSL)等基因的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)大鼠NAFLD模型的建立:與普通飼料組比較，高脂飼料組大鼠體重、肝濕重，肝指數(shù)明顯增加（分別為p＜0.01，p＜0.001，p＜0.01）;同時(shí)血清TG,TC，LDL-C水平也明顯升高（分別為p＜0.001

6、，p＜0.001，p＜0.001），但HDL-C水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）;ALT,AST,ALP水平明顯升高(分別為p＜0.01，p＜0.01，p＜0.001);高脂飼料組大鼠肝組織切片染色可觀察到彌漫性脂肪沉積，脂肪變性明顯，說(shuō)明高脂飼料喂食大鼠4周成功建立大鼠NAFLD模型。
　　(2)PTE對(duì)大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù)的影響:與高脂模型組比較，普洱茶組大鼠體重，肝濕重和肝指數(shù)均明顯降低（分別為P＜0.001，P＜0

7、.001，P＜0.001）;飲食干預(yù)組大鼠體重與高脂模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），而肝濕重和肝指數(shù)明顯降低（分別為P＜0.001，P＜0.001）。與飲食干預(yù)組比較，普洱茶組大鼠體重明顯減輕(p＜0.001)，但肝濕重及肝指數(shù)高于飲食干預(yù)組(分別為p＜0.001，p＜0.001)。與正常對(duì)照組比較，普洱茶組大鼠體重明顯降低(p＜0.001)，但肝濕重與肝指數(shù)高于正常對(duì)照組（分別為p＜0.001，p＜0.01）;飲食干預(yù)組大鼠體

8、重，肝濕重及肝指數(shù)與正常對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。
　　(3)PTE對(duì)大鼠肝臟病理的影響:與高脂模型組比較，普洱茶組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性得到顯著改善，肝組織脂滴數(shù)量顯著減少;飲食干預(yù)組大鼠肝脂肪變性同樣明顯好轉(zhuǎn)。飲食干預(yù)組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)基本接近正常對(duì)照組。與飲食干預(yù)組和正常對(duì)照組比較，普洱茶組大鼠肝臟病理切片僅有少量微小的脂滴存在。
　　(4)PTE對(duì)大鼠肝臟TG,TC含量的影響:與高脂模型組比較，普洱茶組大鼠肝

9、臟TG、TC含量顯著降低（分別為p＜0.001，p＜0.001）;飲食干預(yù)組肝臟TG、TC含量也明顯減低（分別為p＜0.001，p＜0.001）。與飲食干預(yù)組比較，普洱茶組大鼠肝臟TC含量仍高于飲食干預(yù)組(p＜0.001)、TG含量差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05）。與正常對(duì)照組比較，普洱茶組大鼠肝TG含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），TC含量則高于正常對(duì)照組(p＜0.001);飲食干預(yù)組大鼠肝TG、TC含量與正常對(duì)照差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

10、義（p＞0.05）。
　　(5)PTE對(duì)大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C水平的影響:與高脂模型組比較，普洱茶組大鼠血清TG、LDL-C水平明顯降低（p＜0.001,p＜0.01），而血清TC、HDL-C水平明顯增高（分別為p＜0.05，p＜0.001）;飲食干預(yù)組大鼠血清TC，LDL-C水平比高脂模型組明顯降低（分別為p＜0.01,p＜0.001），HDL-C水平則明顯升高(p＜0.05)，但血清TG水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

11、(p＞0.05)。與飲食干預(yù)組比較，普洱茶組大鼠血清TG水平明顯降低(p＜0.01)，但TC、HDL-C水平卻高于飲食干預(yù)組（分別為p＜0.001，p＜0.001），而LDL-C水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。與正常對(duì)照組比較，普洱茶組大鼠血清TC，HDL-C水平高于正常對(duì)照組(分別為p＜0.001，p＜0.001)，而TG、LDL-C水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);飲食干預(yù)組大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平與

12、正常對(duì)照組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為p＞0.05）。
　　(6)PTE對(duì)大鼠血清ALT,AST,ALP水平的影響:與高脂模型組比較，普洱茶組大鼠血清ALT,AST水平明顯降低（分別為p＜0.01，p＜0.01），而ALP水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）;飲食干預(yù)組大鼠血清ALT,AST,ALP水平均明顯降低（分別為p＜0.001，p＜0.001，p＜0.001）。與飲食干預(yù)組比較，普洱茶組大鼠血清ALT，ALP水平高于飲食干預(yù)

13、組(p＜0.001，p＜0.001)，AST水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。與正常對(duì)照組比較，普洱茶組大鼠血清ALT，ALP水平仍高于正常對(duì)照組(p＜0.001，p＜0.001)，AST水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05）;飲食干預(yù)組ALT,AST，ALP水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為p＞0.05）。
　　(7)PTE對(duì)大鼠肝臟基因SREBP-1c、FAS、ACC，PPAR-γ，PPARα，HSLmRNA表達(dá)的影響:與高脂模型

14、組比較，普洱茶組大鼠肝組織SREBP-1c、FAS、ACC，PPAR-γ表達(dá)明顯降低（分別為p＜0.01，p＜0.001，p＜0.05，p＜0.05），PPARα、HSL表達(dá)則明顯增加（分別為p＜0.05，p＜0.01）;飲食干預(yù)組大鼠肝臟SREBP-1c、FAS表達(dá)比高脂模型組明顯降低（分別為p＜0.01，p＜0.001），HSL表達(dá)明顯增加(p＜0.01)，而ACC、PPAR-γ、PPARα表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。與飲

15、食干預(yù)組比較，普洱茶組大鼠肝組織SREBP-1c、FAS、ACC，PPAR-γ，PPARα，HSL表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。與正常對(duì)照組比較，普洱茶組大鼠肝組織SREBP-1c、FAS、ACC，PPAR-γ，PPARα，HSL表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);飲食干預(yù)組大鼠肝組織SREBP-1c、FAS、ACC，PPAR-γ，PPARα，HSL表達(dá)與正常對(duì)照差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　結(jié)論:

16、>　　(1)本實(shí)驗(yàn)通過(guò)喂食大鼠高脂飼料4周成功建立了NAFLD模型，此模型與人類NAFLD相似，適合于NAFLD防治的實(shí)驗(yàn)研究。
　　(2)PTE能改善肝功能、肝臟脂肪變性，還有調(diào)節(jié)血脂，降低體重的作用，對(duì)NAFLD具有良好治療作用。
　　(3)PTE通過(guò)降低大鼠肝臟PPAR-γ和SREBP-1c及其目標(biāo)基因FAS、ACC的表達(dá)，抑制肝臟脂肪酸吸收和脂肪合成;上調(diào)肝臟PPAR-α、HSL的表達(dá)，促進(jìn)脂肪酸氧化、肝內(nèi)脂肪分解等