氫溴酸檳榔堿（Ah）促胃腸動力效應(yīng)的研究及蛋白組學(xué)初探.pdf

1、目的：觀察氫溴酸檳榔堿(Ah)對豚鼠體外胃不同部位平滑肌肌條收縮運(yùn)動的影響，并初步探索其作用機(jī)制。通過蛋白質(zhì)組學(xué)方法來比較氫溴酸檳榔堿(Ah)刺激組與對照組大鼠平滑肌細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，初步探討Ah對于大鼠平滑肌收縮作用的分子生物學(xué)水平的可能機(jī)制。 方法：本文將豚鼠離體胃不同部位(6處)平滑肌條置于灌流浴槽，在37℃恒溫、通氧和Krebs液灌注條件下，以乙酰膽堿(ACh)為對照，分別記錄單獨(dú)使用Ah和阻斷劑孵育后Ah的收縮效應(yīng)。

2、將培養(yǎng)的大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞分為2組：正常對照組；Ah刺激組。Ah刺激組是在培養(yǎng)液中加入一定量的(使培養(yǎng)瓶中Ah終濃度為1×10<'-5>mol/L)去離子水配制的1×10<'-4> mol/L的Ah并保持孵育結(jié)腸平滑肌細(xì)胞15 min；同時(shí)正常對照組在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入與Ah刺激組加入Ah等量的去離子水孵育細(xì)胞15 min。兩組均在孵育15 min末收集細(xì)胞，裂解液溶解細(xì)胞蛋白。利用雙向電泳方法分離細(xì)胞蛋白質(zhì)，并用ImgeMaster圖像

3、分析軟件比較這二組細(xì)胞的蛋白質(zhì)圖譜(Ah刺激組為Ah 15min，對照組為Ctr15 min)。 結(jié)果： 1.Ah可顯著增高各部分體外胃平滑肌條的張力，增大收縮振幅和收縮波曲線下面積，兩者均比基礎(chǔ)值有顯著增高(P<0.05)。而且其效應(yīng)強(qiáng)度不同部位有明顯差異?？v肌效應(yīng)：Ah對胃竇縱肌的作用振幅大于胃底、胃體(P<0.01)；效應(yīng)曲線下面積大于胃體縱肌(P<0.01)。環(huán)肌效應(yīng)：Ah對胃竇環(huán)肌作用振幅大于胃底環(huán)肌(P<0.

4、05)；效應(yīng)曲線下面積大于胃體和胃底環(huán)肌(P<0.05)，對胃體環(huán)肌作用的曲線下面積亦大于胃底環(huán)肌(P<0.05。阿托品和維拉帕米均能部分阻斷Ah的收縮作用，顯著降低其振幅(P<0.01)。 2.多次實(shí)驗(yàn)獲得了重復(fù)性可的結(jié)腸平滑肌細(xì)胞蛋白質(zhì)圖譜。分析蛋白質(zhì)圖譜發(fā)現(xiàn)Ah 15 min較Ctr 15 min有10種蛋白表達(dá)上調(diào). 結(jié)論： 1.Ah對豚鼠離體胃平滑肌條的收縮活動有明顯興奮作用，推測這種效應(yīng)部分介導(dǎo)于M-